最新药学专业毕业论文开题报告

时间：2024-09-10 03:27:43 开题报告我要投稿

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　　毕业论文题目：梓醇对D-半乳糖拟老化神经元的作用研究

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　　背景介绍:

　　随着世界人口中老年人比例和绝对数量的不断攀升，由衰老引起的人口老化相关疾病的发病率明显升高，与衰老相关的疾病已成为科学家面临的一项重要挑战。由于这类疾病常伴有严重的认知障碍及精神异常症状，甚至瘫痪和感觉障碍[1]，严重危害着老年人的健康，同时也给家庭、社会带来了沉重的负担。因此探讨脑衰老机制，研究有效的延缓衰老进程的药物，防治老年疾病己成为当今社会和医药学界研究的重大课题。

　　在诸多老年性疾病中，神经退行性疾病患病率逐年提高，已经成为影响人们健康水平和生活质量的重大社会问题。神经退行性疾病是中枢系统神经组织非正常退变引起的一类进行性功能缺陷与衰退疾病，如阿尔茨海默病(老年痴呆)，帕金森病，肌萎缩侧索硬化症，亨廷顿氏舞蹈症等[2-4]。其中，老年痴呆的患病率占老年人口的4.6%，其中半数为老年原发性退行性痴呆。流行病学调查也显示，在65岁以上的人群中，老年原发性退行性痴呆的发病率达2.9%。该病具有复杂的病理生理过程，受基因调控和多种环境因素影响，是一类病因学和发病机制还不清楚的疾病。临床上,对于这类疾病尚无有效控制病程进展的措施,患者最终将丧失生活能力甚至死亡。目前，我国人口老化速度居世界之首，老年人口已超过1亿，因此寻求有效的预防和治疗衰老疾病的药物迫在眉睫。

　　我国中药有着悠久的历史，良好的治疗效果，是中华民族传统文化的灿烂瑰宝，在几千年的实践发展中，已形成了自己独特的理论体系。特别是针对疑难病和慢性病，中医药更有它的独到之处。中药具有多靶点多效性特点，既可改善症状以治标，又可提高机体抗病能力以治本，而且副作用较少、药源丰富。中医在治疗老年性痴呆与记忆减退的数千年临床经验中积累了许多宝贵的知识。自20世纪80年代以来，由于化学药品开发所存在的技术难度高、价格昂贵、毒副作用明显和环境污染严重等实际问题，传统中医药的研究受到了广泛的关注。

　　地黄是常用的补益中药，为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libsch的新鲜根茎或干燥块根，始载于《神农本草经》，被列为上品[5]。地黄在我国有1000多年的药用历史，应用十分广泛，对免疫、血液、内分泌、心脑血管、神经系统及抗菌、抗炎等方面均有一定的作用[6]。单味地黄[7]和以地黄为主的复方在衰老及其相关疾病治疗中的应用历史也十分久远。现代药理学实验发现其主要的活性组分为环烯醚萜苷类和地黄糖类。

　　梓醇是地黄中含量最高的的环烯醚萜苷类，属于环氧醚型单萜类化合物。目前本实验室分别在细胞和动物水平上证明了梓醇具有神经保护作用，可能是潜在的延缓衰老和治疗神经退行性疾病如老年痴呆、帕金森疾病的药物。由于衰老是各种神经退行性疾病发生的根本要素，研究梓醇的抗衰老作用对预防和治疗该类疾病具有重要意义[8-9]。

　　实验前期发现梓醇具有改善D-半乳糖致衰老模型小鼠记忆减退的功效，同时能提高脑组织抗氧化能力和能量代谢障碍,因此本研究利用D-半乳糖引起神经元老化的模型进一步研究梓醇抗衰老的作用机制，为该药的开发和临床应用奠定一定的基础。

　　研究意义:

　　1、D-半乳糖致衰老神经细胞模型鲜见报道，明确该模型作用机制有助于利用此模型进行抗衰老药物的筛选和机理研究。

　　2、梓醇在衰老动物模型上的效果明显，利用细胞模型的研究有助于阐明梓醇抗衰老作用的分子作用机制。

　　研究内容:

　　采用小鼠脑神经元细胞原代培养,以D-半乳糖诱导体外神经元细胞衰老,并通过研究药物梓醇的加入对神经元细胞的作用,进行细胞形态学观察、细胞活力、细胞凋亡等综合指标的测定。

　　实验过程中应用细胞免疫组化染色和荧光染色技术、流式细胞仪、荧光显微镜、紫外分光光度计、荧光酶标仪等方法手段，研究梓醇在体外的神经保护作用机制。

　　预期达到的成果和水平:梓醇对D-半乳糖引起的小鼠脑神经元细胞衰老有保护作用.

　　因此本课题拟利用原代培养SD大鼠乳鼠脑皮层神经细胞，从超微结构、细胞周期分析及SA-β-半乳糖苷酶(Senescence associated β-galactosidase)化学染色等指标观察D-半乳糖培养对神经元拟老化反应并从生化方面研究梓醇的抗老化作用。

　　研究重点难点:

　　1、掌握原代神经元细胞的培养、免疫组织化学等实验技术。

　　2、明确D-半乳糖致神经元衰老的作用浓度和作用时间范围。

　　3、初步研究D-半乳糖致神经元衰老的作用机理。

　　4、明确梓醇对D-半乳糖致衰老神经元的作用效果。

　　课题名称 HPLC法测定伏立诺他有关物质和含量的研究

　　[研究的主要目的和意义]

　　vorinostat (商品名Zolinza) 是Merck 公司开发的世界上第一个抑制组蛋白脱乙酰基酶( his2tone deacetylase ,HDAC) 的新型抗癌药物,该药于2006 年10 月6 日获得美国FDA 批准上市,用于其他药物治疗时或治疗后仍不能治愈、或恶化、或病情反复情况下的转移性皮肤T 淋巴细胞瘤。vorinostat 化学名: N-羟基-N苯基辛二酰胺;英文名: N-hydroxy-N-phenyloctane-diamide

　　vorinostat 属于组蛋白去乙酰化酶抑制剂类抗肿瘤药物,低浓度( IC50 < 86 nmol·L - 1) 即可以有效抑制组蛋白脱乙酰酶HDAC1 、HDAC2 、HDAC3 和HDAC6 的活性,抑制组蛋白次乙酰化,因而从基因水平调控细胞周期,阻断癌细胞基因复制,并激活其凋亡基因,达到抑制和杀灭癌细胞的效果。但vorinostat 的抗癌机制仍在深入研究之中,其具体作用机制尚不完全清楚[6 - 7 ] 。两项临床试验证明了vorinostat 的安全性和有效性,其中包括107 名接受其他药物治疗后又复发的CTCL 患者。按皮肤损伤改善标准评分等级的判断,接受Zolinza 治疗的患者中30 %有所改善,疗效平均持续168 d。

　　一些生物学数据已经证明了vorinostat 在皮肤癌，前列腺癌治疗中的有效性。而且近年研究vorinostat 不仅可以单独作为肿瘤治疗药物,还可以与其它抗癌药物联合用药, 减少对正常细胞的毒性,具有增效作用。可与转录调节因子(如52 杂氮22′2 脱氧胞苷、视黄酸、mRNA 转录抑制剂flavopiridol)[51- 53] 、凋亡受体配体(如阿霉素、长春新碱、依托泊苷、多烯紫杉醇)[54- 56]、化疗药物(如抗代谢药吉西他宾、全反式维甲酸) [57,58]以及激酶抑制剂、放射线等联合用药。近年来研究发现vorinostat

　　还可影响到有丝分裂、DNA 复制和修复以及调控非组蛋白的蛋白质乙酰化程度。但是该药用于临床治疗癌症仍然需要解决一些问题如: 抑制剂对HDAC 酶系的选择识别作用、选择最佳药用剂量、治疗周期以及寻找更多可以促进这种药抑制作用的物质等。毋庸置疑,随着对HDACIs 抗癌机理的深入研究,vorinostat 将会有广阔的应用前景。

　　伏诺立他目前在国内还没有上市，我们准备仿制该品种，建立该药的质量标准，用建立的标准对原料和制剂进行有关物质和主药含量进行研究。

　　[采用的研究手段及文献综述]

　　根据破坏试验的结果，结合伏立诺他合成工艺，建立伏立诺他有关物质检查方法，并对其进行方法学验证。

　　1.仪器与药品

　　Waters 996光电二极管阵列检测器，Waters Empower色谱工作站，试药及其中间体均由南京海纳医药科技公司提供

　　2. 色谱条件的建立

　　2.1检测波长的选择

　　取伏立诺他适量,用流动相制成每1ml含15μg的溶液,照分光光度法(中国药典2005年版二部附录Ⅳ A)在200～400 nm波长范围内扫描测定

　　2.2系统使用性试验

　　色谱柱:Diamonsil C18 ( 250 mm ×4. 6 mm, 5μm)色谱柱为分析柱;乙腈- 0.1%磷酸溶液(三乙胺调PH3.0)为流动相，不断调节流动相比例，梯度洗脱，流速为1.0 ml ·min- 1 , 检测波长为241nm, 柱温30℃, 进样量: 20μl。

　　根据合成工艺,伏诺立他成药中可能引入一系列的合成中间体及原料还有杂质，取本品可能带入的杂质、中间体分别加流动相适量溶解;另取杂质中间体及伏立诺他适量,用流动相制成适宜浓度的溶液,精密

　　吸取杂质，中间体与吡非尼酮混合溶液各20 μl,分别进样，考察分离度，理论塔板数，及拖尾因子，再根据具体条件进行调整，选出最适合的条件。

　　2.3专属性试验

　　取供试品,进行高温、光照、酸、碱、氧化破坏试验。

　　热降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,置140℃高温4 h后,用流动相溶解并稀释至刻度; 光降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,用流动相制成每1 ml含吡非尼酮0. 8 mg的溶液,置紫外灯光下48 h;

　　酸降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加2mol·L - 1盐酸溶液5 ml,放置4 h,用2 mol·L - 1氢氧化钠溶液调至中性,加流动相稀释定容;

　　碱降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加2mol·L - 1氢氧化钠溶液放置4 h,溶液颜色变黄,另加2 mol·L - 1盐酸溶液调至中性,加流动相稀释定容;

　　氧化破坏溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加过氧化氢5 ml,避光放置4 h,用流动相稀释定容。照高效液相色谱法,取上述各溶液各20μl进样,记录结果，进行分析

　　2.4线性范围：

　　精密称取伏立诺他对照品约15 mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。分别精密量取贮备液1、2、3、4、5 ml置10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取溶液20μl分别注入色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,由溶液浓度(C) 对峰面积(A)线性回归。

　　2.5检测限：取空白基线一段,计算其噪音峰高,再将伏立诺他样品溶液用流动相稀释适当浓度进样,使其峰高为噪音峰高的3倍,记录检测限。

　　2.6精密度试验

　　2.6.1 进样精密度：取标准曲线项下高、中、低三种浓度的溶液,分别重复进样5 次,以峰面积来考察精密度。

　　2.6.2中间精密度：选择不同人员,分别测定同一批样品的含量。

　　2.7重复性试验：分别取同一批样品, 6份,精密称定,照样品测定项下操作,计算含量。

　　2.8稳定性试验：照标准曲线项下的方法配制高、中、低三种浓度的溶液,分别于0、1、2、4、6、8 h测定。考察其稳定性

　　2.9含量测定：取本品适量,精密称定,用流动相制成每1ml含50μg的溶液,作为供试品溶液,精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积;另取经干燥至恒重的伏立诺他对照品适量,同法测定,按外标法以峰面积计算,即得。

　　2.10有关物质测定：取本品适量,精密称定,用流动相制成每1 ml含0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1 ml,置100 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10% ～25%;再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,最大单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1 /2 ( 0.5% ) ,各杂质峰面积总和,不得大于对照溶液主峰面积( 1% )。

　　参考文献：

　　【1】胡杨，陈国华，吴燕，杨尚彦.伏诺立他的合成[J].中国医药工业杂志，2009，40(7)：481-482.

　　【2】黄小平，徐江. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂类抗癌药Vorinostat[J].化工中间体，2009，06：11-13.

　　【3】Sakajiri S, Kumagai T, Kawamata N, et al. Histone deacetylase inhibitors profoundly decrease proliferation of human lymphoid cancer cell lines [J]. Exp Hematol, 2005,33(1): 53-61.

　　【4】Robert A.Parise, Julianne L.Holleran, Jan H.Beumera, Suresh Ramalingama, Merrill J. Egorin. A liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometric assay for quantitation of the histone deacetylase inhibitor, vorinostat (suberoylanilide hydroxamicacid, SAHA),and its metabolites in human serum[J]. Chromatography B, 840 (2006) 108

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