探讨益寿饮延缓D-半乳糖所致衰老作用机理

探讨益寿饮延缓D-半乳糖所致衰老作用机理

摘要：　目的探讨益寿饮延缓D-半乳糖所致衰老作用机理。方法采用小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖溶液制备小鼠亚急性衰老模型，空白对照组、模型对照组、阳性对照组（维生素E 20 mg/kg）和3个不同剂量的益寿饮给药组（1，2，3g生药/kg）分别灌胃45 d后，测定小鼠脾脏指数和全血中过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力。结果益寿饮高、中、低3个剂量组及阳性对照组均能显著提高亚急性衰老小鼠脾脏指数和全血中CAT和GSH-Px活力（P＜0.05，P＜0.01）。结论益寿饮对于D-半乳糖诱发的亚急性衰老模型有明显的延缓衰老作用。

关键词： 益寿饮延缓衰老；脾脏指数；过氧化氢酶；谷胱甘肽过氧化物酶
　
中药益寿饮由莲子、山药等若干味中药提取制备而得。根据查阅相关书籍及文献资料，该方中各味药物均具有一定的益气养阴、延缓衰老作用。为了系统地研究该复方中药提取液的延缓衰老作用，笔者考察了益寿饮提取液对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的脾脏指数、全血中过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力的影响，从而对益寿饮提取液延缓衰老的效果及作用机理进行初步探讨。
　　1 材料与仪器
　　1.1 动物健康二级昆明种小鼠72只，雌雄兼半，体质量在18～22 g，由中国医学科学院实验动物研究所提供，SCXK（京）2005-0013。
　　1.2 药物益寿饮提取液：由中药莲子、山药等按照处方经水提取后浓缩制备，本实验室自制；阳性药物维生素E胶丸（批号20080124），由北京双鹤药业生产；D-半乳糖（批号20071201），购自北京化学试剂公司。
　　1.3 试剂CAT试剂盒（批号：20080518）、GSH-Px试剂盒（批号：20080519），均由南京建成生物工程研究所生产。
　　1.4 仪器752-紫外光栅分光光度计，上海分析仪器总厂制造；AE100电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；LD5-2A离心机，北京医用离心机厂。
　　2 方法
　　2.1 动物分组与给药剂量将健康二级昆明种小鼠随机分成6组：空白对照组，模型对照组，益寿饮低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组，各组小鼠皮下注射及灌胃剂量见表1。各组动物连续给药45 d，第46天精确称取小鼠体质量后，摘除眼球取血，待测CAT和GSH-Px活力；取血后将小鼠脱臼处死，分离小鼠脾脏，计算小鼠脾脏指数。表1 各组实验动物分组及给药剂量（略）
　　2.2 测定指标及测定方法
　　2.2.1 脾脏指数记录小鼠脾脏重量及体质量，按照下面公式计算脾脏指数。
　　脾脏指数=脾脏重量/mg体质量/g
　　2.2.2 全血中CAT测定方法取小鼠新鲜血液20 μl，加双蒸水980 μl，混匀配成1∶49的溶血液，按照试剂盒说明书进行测定。
　　2.2.3 全血中GSH-Px测定方法取小鼠新鲜血液10 μl，加双蒸水1 490 μl，混匀配成1∶149的溶血液，充分混匀后，放置5 min直至玻璃管中的溶血液对光呈完全透明状，按照试剂盒说明书进行测定。
　　2.3 数据统计方法实验数据用Statistica 6.0软件进行统计学处理。
　
　　3 结果
　　3.1 益寿饮对小鼠脾脏指数的影响由表2数据可以看出，皮下注射D-半乳糖溶液（100 mg/kg体质量）45 d后，模型对照组小鼠脾脏指数明显低于空白对照组，证明皮下注射D-半乳糖溶液制备得到的亚急性衰老小鼠模型具备自然衰老小鼠的特征，而3个给药剂量组及阳性对照组与模型对照组相比，小鼠脾脏指数分别提高了14.44%，21.04%，23.39%和14.43%。经统计学分析，空白对照组、阳性对照组、益寿饮中剂量组、益寿饮高剂量组与模型对照组之间均有显著性差异（P＜0.05），其中空白对照组、益寿饮中剂量组和高剂量组与模型对照组之间有极显著差异（P＜0.01）；空白对照组与阳性对照组、益寿饮低剂量组之间有显著差异（P＜0.05），其余各组之间均无显著性差异（P＞0.05）。表2 各组动物给药后脾脏指数变化（略）
　　3.2 益寿饮对小鼠全血中CAT和GSH-Px的影响
　　由表3数据可以看出，皮下注射D-半乳糖溶液（100 mg/kg体质量）45 d后，模型对照组小鼠全血中CAT和GSH-Px活力明显降低（降低百分率为67.88%和37.60%），而3个给药剂量组及阳性对照组与模型对照组相比，小鼠全血中CAT活力分别提高了110.54%，154.31%，190.70%和238.83%；GSH-Px活力分别提高了36.18%，38.43%，48.28%和35.17%。经统计学分析，空白对照组、阳性对照组及益寿饮低、中、高3个给药剂量组与模型对照组全血中CAT活力均有极显著性差异（P＜0.01）；益寿饮低剂量组、中剂量组与阳性对照组有显著性差异（P＜0.05），其中低剂量组与阳性对照组之间有极显著性差异（P＜0.01）；空白对照组与低剂量组、中剂量组有极显著性差异（P＜0.01）；低剂量组与中剂量组、高剂量组之间均有显著性差异（P＜0.05），其中低剂量组与高剂量组之间有极显著性差异（P＜0.01），其余各组相互之间均无显著性差异（P＞0.05）。表3 各组动物给药后全血中CAT和GSH-Px活力变化（略）
　4 讨论
衰老一般是指机体生长发育成熟后，机体的生理功能逐渐下降，组织器官逐步发生退行性改变，并最终走向死亡的过程。衰老虽然是一切生物发展的自然规律，而且具有不可逆性，但是在一定条件下，衰老的速度是可以减慢的。从古至今，人们一直在探索衰老的机制，试图延缓衰老。到目前为止，有关衰老的学说有很多，有代表性的有自由基学说［1］、免疫学说［2］、线粒体学说［3］、内分泌功能减退学说［4］、端粒学说［5］等。本文从自由基和免疫学说两方面对益寿饮延缓衰老的作用机理进行了初步探讨。
脾脏是细胞成熟分化成浆细胞的重要器官，反映体液免疫的功能，同时，脾脏还具有内分泌功能，是机体免疫-神经-内分泌网络调节环路中心的一个重要组成部分［6］。此外，脾脏是机体最大的周围淋巴器官，由白髓和红髓组成：白髓是密集的淋巴组织，围绕中央静脉而分布，由动脉周围淋巴鞘和脾小结组成，动脉周围淋巴鞘主要由大量T细胞构成，是脾内的胸腺依赖区，脾小结主要由B细胞构成；红髓由脾索和脾血窦组成。在人类，65岁以上老人免疫系统功能下降同时，脾生发中心数量和体积比26～30岁年轻人明显减少；大于22月龄小鼠脾内生发中心数量及其内的细胞数减少60%～95%［7］。随年龄的增长，白

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