痛平膏主要药理作用实验研究

痛平膏主要药理作用实验研究

曹春然，周建平，王志斌                                                                                                     【摘要】  目的  观察痛平膏的主要理作用，为应用提供实验依据。方法  用热板法、醋酸法致疼痛小鼠模型，观察其镇痛作用；用角叉菜胶、二甲苯致大、小鼠急性炎症模型，考察其抗炎作用；采用葡聚糖致微循环障碍小鼠模型，研究痛平膏的活血作用。结果  痛平膏可提高动物因热刺激致痛的痛阈值，减少因醋酸刺激而发生扭体反应的动物只数；对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀有抑制作用，可减轻二甲苯致小鼠耳肿胀的肿胀度；对静脉注射葡聚糖溶液引起的小鼠微循环障碍，有明显的改善作用。结论  痛平膏具有镇痛、抗炎和活血的药理作用。
   
    【关键词】  痛平膏；  镇痛作用；  抗炎作用；  活血作用
    
        【Abstract】  Objective  To study the principal pharmcodynamics of  Tongping ointment and provide experimental data for clinical application. Methods  Methods of acetic acid-induced writhing and hot-plate test in mice were used to study the analgesic effect. Models of acute inflammatory reactions of xylene-induced mouse ear edema and carrageen-pastern-induced rat paw edema were performed to study the anti-inflammatory effects. To prepare the model of mouse ears microcirculatory disturbance by intravenous injection of dextran solution for observing promoting blood circulation effect of Tongping ointment. Results  The pain threshold was remarkably improved and the number of  writhing mice induced by acetic acid were decreased. Tongping ointment significantly suppressed carrageen-pastern-induced rat paw edema and xylene-induced mouse ear edema. The microcirculatory disturbance induced by injecting dextran solution was ameliorated markedly. Conclusion  Tongping ointment manifested analgesic effect，anti-inflammatory and promoting blood circulation effects obviously.
    
        
    痛平膏是由骨碎补、防风、乳香、没药等多味组成的外用中药复方制剂。具有舒筋活血、祛风散寒、消肿止痛的功效。临床可用于颈椎、关节痛、风湿痛、骨质增生痛等症。为获得临床用药的实验依据，采用动物模型观察其镇痛、抗炎和活血作用。
   
    1 
   
    1.1  动物  SD品系大鼠，SPF级，♂，140±10g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2002－0003；ICR品系小鼠，SPF级，♀♂，体重19±1g、28±1g（♂，用于抗炎试验），由北京维通利华实验动物技术有限公司提供；昆明种小鼠，SPF级，♀♂，体重19±1g，由中国药品生物制品检定所提供，许可证号：SCXK 11－00－0010。
   
    1.2  药品、试剂  痛平膏，批号：020801，由北京百草药业提供；扶他林乳剂，批号：01193，北京诺华制药有限公司生产；酸痛灵喷剂，批号：XSH00200，厦
    
        
    1.3  仪器  热板测痛仪，型号：GJ-8402 ，由浙江宁海白石仪器厂生产；光学显微镜，型号：XSZ-H，重庆光学仪器厂生产。
   
    2  方法及结果
   
    2.1  分组及给药  动物分为痛平膏大、中和小剂量组、空白对照组、酸痛灵喷剂组、扶他林乳剂组。痛平膏各组剂量分别为0.36、0.18和0.09g生药/cm2，酸痛灵喷剂组为0.36ml/cm2，扶他林乳剂组为0.1g/cm2，空白对照组给予生理盐水。
   
    2.2  镇痛试验
   
    2.2.1  对热板法致小鼠疼痛的影响［1］  　因雄性小鼠受热阴囊触及热板，可出现假性结果，所以本试验采用雌性小鼠。本次试验采用一次性给予动物供试品及对照品，观察其药理作用。
    
    取体重为19±1g的ICR种小鼠，♀，健康。试验前1日，先筛选合格小鼠，每次1只放在加热至恒温的铁板（55℃）上，小鼠自放在热板上，至出现因热刺激而舔后足所需的时间（s），作为该鼠的痛阈值，出现舔足反应后将小鼠取下。凡舔后足时间小于5s或大于30s或跳跃者弃之不用。间隔1h，重复测定其正常痛阈值，取两次正常痛阈平均值，作为该鼠的给药前基础痛阈值，以平均值不超过30s为合格。将合格小鼠随机分为6组，并将小鼠背部的被毛去除（面积约1cm2）。试验当日，将适量供试品及对照品涂抹于橡皮膏上，固定在小鼠的背部，以不影响其舔后足为度。在给药后不同的时间点，将小鼠放在加热至恒温（55℃）的铁板上，观察其发生因热刺激而出现的舔足反应时间，小鼠出现舔足反应后，迅速将小鼠取下，以避免烫伤。痛阈值测定时间点分别为给药后0.5、1、2、4、6h。本试验观察受试物的镇痛作用及时效关系。以受试动物出现因热刺激而舔后足反应的时间（痛阈值）为观察指标，对所得的试验数据采用t进行。同时按下式计算各剂量组动物镇痛百分率。结果见表1。
   
    镇痛百分率=给药组动物痛阈值-空白对照组动物痛阈值〖〗空白对照组运动痛阈值×100%

表1  痛平膏对热板法致小鼠疼痛模型的影响   (x±s，n=10)

注：与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01，括号内为各给药组动物的镇痛百分率。

    2.2.2  对醋酸致小鼠疼痛的影响［1］  取体重为19±1g的ICR种小鼠，♀♂，健康，共84只。本次试验采用一次性给予动物供试品及对照品，观察其药理作用。试验前1日，将受试动物的腹部被毛去除（面积约1cm2）。试验当日，按体重随机分成6组，涂抹于橡皮膏上，固定在小鼠的腹部，给药1h后，将橡皮膏去除，避免影响小鼠的扭体反应。用生理盐水新鲜配置0.6％的醋酸溶液，按0.1ml/10g的剂量，腹腔注射给予小鼠。以给予醋酸后15min内，各组受试动物出现扭体反应的只数为观察指标，并进行χ2检验，与模型对照组比较，组间差异是否有显著性。同时按下式计算各剂量组动物的扭体反应发生率和镇痛百分率。结果见表2。
   
    扭体反应发生率=发生扭体反应的动物数〖〗该组动物的总数×100%
   
    镇痛百分率=模型对照组扭体反应鼠数-给药组扭体反应鼠数〖〗模型对照组扭体反应鼠数×100%

表2  痛平膏对醋酸致小鼠疼痛模型的影响  （n=14）

注：与模型对照组比较。

   
    2.3  抗炎试验

    2.3.1  对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响［2］  因目前不能确证性别对炎症模型的影响，且雌激素有抗炎和免疫抑制作用，故选择雄性大鼠作为本试验的受试动物。取体重为140±10g的SD种大鼠，♂，健康，共50只。试验前1日，将试验用大鼠右后腿内侧的被毛去除（面积约1cm2）。试验当日，按体重随机分成5组，分别为模型对照组，扶他林乳剂组，痛平膏大剂量组、中剂量组、小剂量组。分别测量每只大鼠右后肢正常踝关节周长，作为造模前的基础值。测量正常周长后，在右后肢的内侧皮肤，分别给予各组动物适量受试品和对照品，用橡皮膏固定。给药30min后，分别在大鼠右后肢足跖皮下注射1％角叉菜混悬液0.1ml/只致炎。在致炎后1、2、4、6h，各测量一次右侧踝关节的周长。以各组动物致炎后与致炎前的踝关节周长之差（肿胀度）为观察指标，采用t检验进行数据统计，按下式计算肿胀抑制率。结果见表3。
   
    肿胀抑制率=模型对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀率〖〗模型对照组平均肿胀度×100%

表3  痛平膏对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响   (x±s，n=10)

注：与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01，括号内为各给药组动物的肿胀抑制率，“-”表示肿胀度大于模型对照组。

    2.3.2  对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响［2］  取体重为28±1g的ICR种小鼠，♂，健康，共60只。试验当日，按体重随机分成5组，分别为模型对照组，扶他林乳剂组，痛平膏大剂量组、中剂量组、小剂量组。每鼠左耳外侧涂100％二甲苯0.02ml致炎，致炎后30min，在致炎的左耳内侧，涂抹适量受试品和对照品。致炎2h后，将小鼠断颈处死，清理剩 余物，沿耳廓基线剪下两耳，用打孔器分别在同一部位打下圆耳片，用天平称重。以每鼠的左耳片与右耳片重量之差（肿胀度）为观察指标，采用t进行数据，与模型对照组比较组间差异的显著性。按下列公式计算肿胀抑制率。结果见表4。
   
    肿胀抑制率=模型对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度〖〗模型对照组平均肿胀度×100%

表4  痛平膏对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响  （x±s，n=10）

注：与模型组比较**P<0.01

    2.4  活血作用试验［1］  取体重为19±1g的昆明种小鼠，雌雄各半，健康，共60只。试验共分6组，空白对照组，模型对照组，痛平膏扶他林乳剂组，痛平膏大剂量组、中剂量组和小剂量组。试验前1日，将受试小鼠的背部被毛去除（面积约1cm2）。试验当日，分别给予适量的受试品和对照品，用橡皮膏固定在背部。给药30min后，用1％戊巴比妥钠溶液0.05ml/10g腹腔麻醉。剪去耳廓背侧的细毛，并将小鼠腹部向下固定在显微镜的载物台上，使鼠耳固定，调节显微镜（放大倍数为10×10），直至可以清楚地观察小鼠耳廓微循环情况。固定视野，调节测微尺的位置，使其可以测量血管直径的变化。给药35min时，观察小鼠耳廓选定部位的微小动、静脉的管径，此测定值为造模前基础值（A、V），并选择血液流态相似的微小静脉，用于观察造模后血液流态的改变。给药40min时，除空白对照组动物外，均按0.3ml/20g的剂量从尾静脉注射葡聚糖溶液（25mg/ml），空白对照组给予同体积生理盐水注射液。分别在造模后10、20、30min时，连续观察小鼠耳部选定的同一位置，记录微动、静脉管径及血液流态的变化。以各组动物造模前与造模后的微动、静脉管径的差值（△A、△V）为观察指标，同时对微静脉血液的流态进行评分，并作为观察指标，对试验所得数据进行t检验。评分的标准见表5

表5  微静脉血液的流态评分标准

    分值流态评定标准4分线粒流血流快速，成直线，但有沙粒感3分粒线流血流较快，成直线，但明显有沙粒感2分粒流血流快，成直线，可区分细胞1分粒缓流血流缓慢，明显区分细胞。可见细胞团试验结果见表6。

表6  痛平膏对葡聚糖溶液致小鼠耳廓微循环障碍的影响  （x±s，n=10，μm）

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

注：与模型组比较*P<0.05，**P<0.01

    3  讨论
    
    炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应，其局部特征是红、肿、热、痛和功能障碍。为研究痛平膏的主要的作用，本实验分别采用镇痛、抗炎和微循环障碍的经典动物病理模型进行观察。实验结果表明，痛平膏可提高动物因热刺激致痛的痛阈值，减少因醋酸刺激而发生扭体反应的动物只数；对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀有抑制作用，可减轻二甲苯致小鼠耳肿胀的肿胀度；对静脉注射葡聚糖溶液引起的小鼠微循环障碍，有明显的改善作用。痛平膏对动物炎症、疼痛模型和微循环障碍模型均具有明显的抗炎、镇痛和活血作用，为临床用于炎症反应提供了实验依据。
    
    痛平膏是外用制剂，其吸收方式和作用时间与常用的口服制剂有较大的区别，为获得较完整的实验数据，实验中尽量测定其作用时间，以获得时－效曲线，供临床使用参考。

【参考文献】

    1  陈奇.药理实验研究方.北京：人民卫生出版社，1993，360－361；377－378；502－503.
    2  徐叔云，卞如濂，陈修.药理试验方法学，第3版.北京： 人民卫生出版社，2002，911-913.

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