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翻白草不同方法提取物对小鼠降血糖作用
翻白草(Potentilla discolor Bunge)为蔷薇科委陵菜属多年生草本植物，根部或干燥全草均可入。全国各地均有分布，为我国传统〔1〕。近年来，民间流行用翻白草治疗糖尿病并取得一定的疗效。为了解翻白草降血糖作用机制，开发糖尿病新药或品，本研究对翻白草进行提取，按极性不同的3个部分，利用四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠模型进行活性筛选，以确定具有较强降血糖活性的部分。1 与方法
1?1 实验动物 昆明种小鼠(雄性)100只(昆明动物所)(合格证编号：滇实验动物证第2002106号)。
1?2 主要试剂及仪器 四氧嘧啶(美国Sigma公司)；葡萄糖测定试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司，批号20030101)：消渴丸(广州中一药业有限公司，批号：E01895)；722型光栅分光光度计(上海分析仪器总厂)。
1?3 方法
1?3?1 样品提取并初步分离 利用乙醇浸提，乙酸乙酯萃取，D101大孔树脂柱层析，将翻白草分为I～Ⅲ部分，分别对应D101大孔树脂水洗脱部分、D101大孔树脂甲醇洗脱部分、乙酸乙酯萃取物。
1?3?2 实验动物糖尿病模型的建立〔2，3〕 实验动物体重(26±2)g，禁食16h，准备给予四氧嘧啶造模。四氧嘧啶溶液临用前配制，浓度为12mg／ml。给药方式为腹腔注射，剂量120mg/(kg·bw)，一周后，于第8d断食3h后，眼眶内眦采血，离心取上层血清在24h内用葡萄糖氧化酶法测定血糖。取血糖值>12mmol／L的糖尿病模型小鼠分组进行翻白草降血糖实验。
1?3?3 实验动物分组及处理 取血糖值>12mmol／L的糖尿病模型小鼠54只，正常小鼠10只作为对照组，共计64只，分为6组，分为糖尿病模型组(11只)、阳性对照组(10只)和3个实验组(各11只)。正常对照组、糖尿病模型组给予蒸馏水，剂量为每天450mg／(kg·bw)；阳性对照组给予降血糖药物消渴丸，剂量为3?75g(kg·bw)；3个实验组I～Ⅲ分别给予D101大孔树脂水洗脱物、D101大孔树脂甲醇洗脱物、乙酸乙酯萃取物，剂量均为每天450mg/(kg·bw)。给药方式为灌胃，每天1次，时间30d。30d后，测血糖值，条件和方法同前。30d内每周称各组小鼠空腹体重，观察体重变化。
1?3?4 分析 采用SPSS11?0统计软件，进行方差分析及t。
2 结果
实验组Ⅰ、Ⅱ与糖尿病模型组比较，血糖值降低差异无统计学意义(P>0?05)，表明对糖尿病小鼠降血糖作用不明显。而消渴丸组与实验组Ⅲ与糖尿病模型组比较，血糖降低差异有统计学意义(P<0?05)，表明实验组Ⅲ即乙酸乙酯部分对糖尿病小鼠有降血糖作用，其降血糖效果与降糖药物消渴丸类似。因此，可认为翻白草降血糖活性成分主要存在于乙酸乙酯部分，将该部分进一步研究，见表1。实验期间，通过对动物体重的观察可知，糖尿病模型组动物体重增长缓慢，其余各组动物体重均稳定增长，但各组之间比较差异无统计学意义(P>0?05)，可认为翻白草各部分对糖尿病小鼠的体重没有影响。
表1 翻白草对糖尿病小鼠血糖水平的影响（略）
注：与糖尿病模型组比较，a P<0?05：与实验前比较，c P<0?05；与糖尿病模型组比较，b P<0?01；与其余各组比较，d P<0?01
正常小鼠的血糖、体重与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0?05)，可认为翻白草的乙酸乙酯部分对正常小鼠的体重、血糖均无影响。
3 讨论
翻白草的根主要含鞣质及黄酮类化合物〔1〕。黄酮类化合物具有多种生理活性，也具有降血糖的活性，其降血糖机制是多方面的〔4，5〕。提示其降血糖活性成分可能是其中的黄酮类物质。本实验结果表明，翻白草乙酸乙酯萃取物具有较强的降血糖作用，并且对正常小鼠的体重、血糖均无影响。其降血糖活性成分可能是其中的黄酮类物质，其降血糖作用机制有待进一步研究。而其余2个部分未显示降血糖作用，原因可能是提取分离过程中一些成分发生损失，或在该剂量下未能显示降血糖活性。
【参考文献】
〔1〕 江苏新院.中药大词典［M］.下册.上海：科学技术出版社，1986：2705.
〔2〕 张均田.现代实验方法［M］.上册.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998：981-986.
〔3〕 郑建仙.功能性食品［M］.3卷.北京：中国轻出版社，1999：484-489.
〔4〕 陈勇，张晴.五羟基黄酮的药研究近况［J］.中草药，1998，29(8)：569-570.
〔5〕 王玮，王琳.黄酮类化合物的研究进展［J］.沈阳医学院学报，2002,4(2)：115-119.
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