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高效液相色谱法测定塞克硝唑中有关物质
0引言
塞克硝唑是5硝基咪唑类抗菌药物，用于厌氧菌和原生动物感染的治疗及手术后厌氧菌感染的预防. 该药由法国罗纳普朗克乐安(RhonePoulenc Rorer)公司于1980年首次在瑞士上市，至今我国尚无厂家大规模生产. 塞克硝唑较甲硝唑有更高的安全性，临床上患者更容易接受，且更容易得到患者的配合. 目前塞克硝唑的生产工艺主要采用2甲基5硝基咪唑、环氧丙烷为起始原料合成制得. 在该生产工艺中，可能有未反应完全或塞克硝唑降解后的物质2甲基5硝基咪唑或环氧丙烷，因此要对塞克硝唑中有关物质(2甲基5硝基咪唑)进行含量控制，通过实验研究[1-2]，采用高效液相色谱法测定塞克硝唑中有关物质，方法简便、灵敏，结果准确.
1材料和方法
1.1材料Waters高效液相色谱仪;600泵490检测器 2010工作站(美国);Hypersil C18柱250 mm×4.6 mm(天津特纳科学仪器有限公司);Precisa120A 电子天平 (上海分析仪器厂); 乙晴为色谱纯，其余试剂均为分析纯. 实验用水均为二次蒸馏水. 2甲基5硝基咪唑(广东永正药业，批号000906，000912，000918)，塞克硝唑对照品(安徽华康医药科技开发有限公司，批号050218).
1.2方法
1.2.1系统适用性试验在塞克硝唑对照品中加入少量2甲基5硝基咪唑，用水溶解，将记录纸速调到1.0 cm/min，进样10 μL，以塞克硝唑计算理论塔板数，其保留时间TR2为5.466 min. 理论塔板数为4138，分离度为2.0，均符合HPLC法的测定要求. n=5.54(5.466〖〗0.2)2=4138. 分离度R=2(TR2-TR1)〖〗W1+W2=2(5.466-3.790)〖〗1.0+0.7=2.0.
1.2.2色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 乙睛水(25∶75)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长310 nm. 理论塔板数以塞克硝唑峰计算不得低于3000.
1.2.3溶液的制备① 供试品溶液 精密称取2甲基5硝基咪唑，用水制成1 g/L的溶液，作为供试品溶液;② 对照品溶液 量取供试品适量，用水制成0.01 g/L的溶液，作为对照品溶液.
1.2.4测定方法及质控标准取对照溶液10 μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为满量程的10%～20%;取供试品与对照品溶液各10 μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍.供试品溶液的色谱图中如显示杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主成分峰的面积.
1.2.5专属性试验由于样品中杂质较少，故将其强酸、强碱、高热水解进行加速破坏，结果酸碱破坏均能检出大量杂质，重现性较好，说明该方法可靠，专属性强.
2结果
按供试品溶液的制备项下方法制得供试品溶液，三批样品按上述色谱条件测定有关物质，批号000906，000912，000918的检测结果(%)分别为0.14，0.16，0.13. 参考《中国药典》2000版二部对甲硝唑原料药有关物质的检查方法，选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，选用不同色谱柱，型号为：①Polarls： C18A PN 2000-250×4.6 mm，5 μm;②Spherisorb：C18 250×4.6 mm，5 μm;③ YWG：C18 250×4.6 mm，10 μm;④KROM250：C18 250×4.6 mm，5 μm;⑤Hypersil：C18 250×4.6 mm，5 μm. 多次试验结果表明，以上型号色谱柱均符合检测要求，最终确定⑤为最佳检测柱.
3讨论
3.1检测波长的选择考虑到原料中总杂质主要为2甲基5硝基咪唑，故用浓度为20 mg/L的2甲基5硝基咪唑水溶液，在200～400 nm处进行紫外扫描，最大吸收波长为311 nm;塞克硝唑水溶液的最大吸收波长为322 nm，在波长为310 nm处2甲基5硝基咪唑和塞克硝唑均有较大吸收，故确定最终检测波长为310 nm.
3.2塞克硝唑的疗效塞克硝唑在许多方面均好于目前临床使用的同类药物甲硝唑、替硝唑. 一般只须一次给药，使用方便，治疗方案容易得到患者的配合. 患者对塞克硝唑的耐受性良好，治疗剂量的塞克硝唑毒性低. 因塞克硝唑在临床治疗阿米巴病、贾第虫病、滴虫病、多种阴道炎症及预防厌氧菌感染等方面是许多国家的常用或首选药物,因此，研究开发塞克硝唑，对于阿米巴和贾第虫病患者、妇女患者尤其是儿童患者是十分必要的. 目前，塞克硝唑在我国尚未大规模生产，因此，选择塞克硝唑进行开发，可以使更多患者用到安全、高效、经济的药物，也使临床治疗时多一种选择.
【参考文献】
[1] 马广慈. 药物分析方法与应用[M]. 北京：科学出版社, 2000：1.
[2] 李发美. 医药高效液相色谱技术[M]. 北京:人民卫生出版社, 1999:10.
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