高效液相色谱法测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量

高效液相色谱法测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量

　　【摘 要】 目的 建立高效液相色谱法测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量。方法 采用Agilengt Eclipse Plus -C18色谱柱，流动相：乙腈-0.1%磷酸(14：86);流速：0.6 ml•min-1;检测波长230 nm。结果 芍药苷在0.4800～8.160 μg范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为98.94%，RSD=0.36%(n=6)。结论 本方法操作简便，专属性强，结果准确，可用于测定芎钩天麻丸中芍药苷的含量。

　　【关键词】 芎钩天麻丸;含量测定;芍药苷;高效液相色谱法

　　[Abstract] Objective To establish a HPLC method for the determination of Paeoniflorin in xionggoutianma pills. Methods The chromatographic system consisted of C18 column,using Acetonitrile -0.1% Phosphate (14：86) as mobile phase.The content was detected at a waveleng of 230nm,the flow rate was 0.6ml•min-1 .Results The Paeoniflorin have a good tincar rolatim in the range of0.0433～0.6938μg(r=0.9999),the average recovery was 98.94%，RSD=0.36%(n=6). Conolusion The established method is accuracy ,sensitive and simple.It can be used for quality control of xionggoutianma pills.

　　[Keywords] xionggoutianma pills; Chlorogenic acid; content determination; HPLC

　　芎钩天麻丸是由川芎、钩藤、当归、石决明、桑寄生、细辛、珍珠母、黄芩、白芍、天麻等14 味药材加工制成的医院制剂，具有滋肾平肝、潜阳熄风、除晕止痛、降血压之功效，主治肝阳上亢、血虚失养引起的高血压，紧张性、血管性神经性头疼、头晕 [1]。白芍为方中君药，芍药苷为白芍的主要有效成分，具有扩张血管、保护脑缺血、抗血栓、抗血小板聚集、抗高血脂等作用，对芎钩天麻丸疗效的发挥起重要作用。现行质量标准中未收载含量测定项目，不能有效的控制药品质量。本文以芍药苷为指标成分，建立了测定芎钩天麻丸中芍药苷的高效液相测定法，为该制剂的质量控制提供了客观的含量评价方法。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　Agilengt 1260高效液相色谱仪，AUW-220 D电子分析天平 DSQ10260超声仪。

　　1.2 试药

　　芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110736-201035);乙腈为色谱纯，水为本单位自制重蒸馏水，其余试剂为分析纯。芎钩天麻丸由柘城县人民医院提供。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色谱柱(4.6×100 mm)

　　流动相：乙腈-0.1%磷酸(14：86)为流动相[2];流速0.6 ml•min-1;检测波长230 nm;进样量10 μl;理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000[3]。

　　2.2 线性关系考察

　　取黄芩苷对照品约12.0 mg，精密称定，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。按照“2.1”项色谱条件，分别进样1、3、5、7、9、11、 13、15、17 μl，记录芍药苷峰面积值，以峰面积积分值(Y)对对照品浓度(X)进行线性回归，得回归方程： Y=235.05674X+12.52003 r=0.9999。结果表明，黄芩苷对照品在0.4800～8.1600 μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

　　2.3 供试品溶液及阴性对照溶液的制备

　　取本品约0.1 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，浸泡4 小时，超声处理20 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 um微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。另取缺白芍的其他味药按处方工艺制成阴性制剂，按上述方法制备阴性对照溶液。

　　2.4 干扰试验

　　取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，按照“2.1”项色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，黄芩苷的保留时间为8.818 min，理论塔板数为3512，黄芩苷与相邻峰的分离度大于1.5，峰型对称。阴性样品无干扰，结果见图1。

　　C阴性对照溶液

　　图1 高效液相色谱图

　　2.5 精密度试验

　　取2.2对照品溶液，重复进样6 次，每次10 μl，记录绿原酸峰面积，RSD=0.39%(n=6)，表明精密度良好。

　　2.6 稳定性试验

　　取同一对照品溶液，分别在0、2、4、8、12、16、24 h进样测定，RSD=0.43%，供试品溶液在24 小时内峰面积基本稳定。

　　2.7 加样回收率试验

　　称取6 份已知含量为6.173 mg/g的样品约0.05 g，精密称定，分别置1～6 号锥形瓶中，分别精密加入对照品储备液1 ml，按照“2.4”项下供试品溶液制备方法制备溶液，按照“2.1”项色谱条件，分别测定，结果见表1。

　　表1 加样回收率试验结果

　　称样量 样中黄芩苷的含量 对照加入量 测得黄芩苷的含量 回收率 平均回收率 RSD

　　(g) (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)

　　0.05132 0.3168 0.4800 0.7904 99.20

　　0.04937 0.3048 0.4800 0.7806 99.46

　　0.04898 0.3024 0.4800 0.7729 98.79 98.94 0.36

　　0.05064 0.3126 0.4800 0.7809 98.52

　　0.05028 0.3104 0.4800 0.7828 99.04

　　0.04966 0.3066 0.4800 0.7759 98.64

　　2.8 样品测定

　　取3批样品，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，各进样10 μl，按外标法计算绿原酸的含量，结果见表2。

　　表2 3批样品中黄芩苷的含量

　　样品编号 1 2 3

　　样品含量(mg/g) 6.092 6.123 6.112

　　3 讨论

　　3.1 提取溶剂的选择

　　有文献报道以稀乙醇为提取溶剂[3]，经过比较发现以甲醇为溶剂测定含量所得的含量高。

　　3.2 流动相选择

　　本试验曾用甲醇-0.05 mol/l磷酸二氢钾溶液(40∶65)为流动相[4]，主成分峰出峰效果较差，而采用乙腈-0.1%磷酸(14：86)为流动相，色谱峰显示，黄芩苷与相邻的组分分离度大于1.5，具有较好的分离效果，且理论板数较高。

　　参考文献

　　[1] 河南省医疗机构制剂标准.

　　[2] 中国药典[S].2010年版.一部.96-97.

　　[3] 谢文健HPLC法测定莪棱胶囊中芍药苷的含量[J].中国药师2010,13(4):592-593.

　　[4] 中国药典[S].2010年版.一部.147-148.

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