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高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量
【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定盐酸溴己新片的含量。方法 色谱柱：Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相: 乙腈?0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(体积比30∶70)，流速1.0 mL·min-1，检测波长为249 nm 。 结果 盐酸溴己新在66.0～96.4 μg·mL-1浓度范围内线性良好(r=0.999 9，n=5),平均回收率为98.85%(RSD=0.60%,n=6)。结论 本法快速、简便、准确，重复性好。
【关键词】 高效液相色谱法;盐酸溴己新;含量测定
Abstract: Objective To establish a method for content determination of bromhexine hydrochloride in tablets.Methods Bromhexine hydrochloride in the tablets was analyzed on an Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)column with mobile phase composed of acetonitrile?0.05 mol·L-1 phosphate buffer (30∶70, final pH3.0 adjusted with 0.2% triethylamine). The flow rate was 1.0 mL·min-1 with UV detection wavelength at 249 nm.Results Calibration graph was linear (r=0.9999, n=6) in concentration range 66.0?96.4 μg·mL-1 . The average recovery of bromhexine hydrochloride was 98.85% and RSD 0.60% (n=6).Conclusions The method is simple, rapid and reproducible.
Key words:HPLC;bromhexine hydrochloride
盐酸溴己新是一种临床上常用的祛痰药，疗效确切。目前盐酸溴己新的含量测定方法有紫外分光光度法[1]、HPLC法[2]和毛细管电泳法[3]，中华人民共和国药典2005年版收载的盐酸溴己新片的含量测定方法为紫外分光光度法，但该法测含量专属性不够强，易受辅料干扰[4]。为系统评价其药品质量，确保临床疗效，本文建立了高效液相色谱法测定盐酸溴己新含量的条件，并与紫外-可见分光光度法的测定结果做比较，结果表明高效液相色谱法更为简便、准确、专属性强。
1、仪器与试药
1.1仪器
岛津LC?10AT型高效液相色谱仪，岛津SPD?10A紫外检测器;UV?2450型紫外?可见分光光度计
1.2试药
盐酸溴己新对照品(100427?200402，供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所;盐酸溴己新片(广州南沙琪宝制药有限公司，批号20060805，20060807，20060810);乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2、方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱：Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相：乙腈?0.05 mol·L-1磷酸盐缓冲液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(体积比30∶70);检测波长249 nm，流速1.0 mL·min-1，进样量20 μL。色谱图见图1。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取10.6 mg盐酸溴己新对照品，置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL至10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，用0.45 μm的微孔薄膜滤过，即得质量浓度为84.80 μg/mL的对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备
精密取样品0.15 g，置于50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2 mL至10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，0.45 μm的微孔薄膜滤过，即得。
2.2.3空白溶液的制备
将不含被分析成分的盐酸溴己新辅料混合均匀后，精密称取93.9 mg到50 mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
图1HPLC图谱 略
2.3线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液4、8、10、16、20 μL,进样测定峰面积。以色谱峰峰面积(A)为纵坐标,对照品进样量(m)为横坐标,绘制标准曲线并进行线性回归,得回归方程：A=27 251m-120 995(r=0.999 9，n=5)，结果表明,盐酸溴己新的进样量在66.0～96.4 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,线性范围是33.92～169.6 μg·mL-1。
2.4精密度试验
取同一对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，每次20 μL，测定峰面积，结果峰面积的RSD为0.59%，表明精密度良好。
2.5稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于制备后0、2、4、8、12、16、24 h进样，按上述色谱条件测定，峰面积的RSD为0.71%。说明盐酸溴己新样品溶液在24 h内基本稳定。
2.6重复性试验
分别取同一批供试品,按“2.2.2”项下方法重复制备样品6份,并按以上色谱条件进行测定，计算得盐酸溴己新含量分别为99.92%、100.93%、100.12%、99.58%、99.50%、101.20%，RSD为0.70%，结果表明供试品制备方法重复性良好。
2.7回收率试验
取已知含量的样品约0.05 g，共6份，精密称定，分别精密加入盐酸溴己新对照品18.00、18.40、20.10、20.90、21.90、22.90 mg，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。
表1盐酸溴己新回收率试验结果(略)
2.8样品测定
分别精密称取3批样品, 按“2.2.2”项下方法制备,按上述色谱条件进行测定，结果见表2。
表2盐酸溴己新片的含量测定结果(略)
3、讨 论
3.1本实验通过对盐酸溴己新对照品溶液进行紫外扫描(190～400 nm)，得到紫外吸收图，结果发现盐酸溴己新在249 nm处有最大吸收峰，故选择249 nm为检测波长。
3.2实验中曾考察过甲醇?冰醋酸水溶液、乙腈?冰醋酸水溶液、甲醇?磷酸盐缓冲液、乙腈?磷酸盐缓冲液等不同的流动相系统，结果发现乙腈?磷酸盐缓冲液(0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液加0.2%三乙胺溶液，用磷酸调节pH为3.0)(体积比30∶70)为流动相时，盐酸溴己新的峰形好，赋形剂也不干扰其测定。本法测定盐酸溴己新的含量，回收率高，呈良好线性，重复性良好，符合定量分析要求。
3.3同时对相同3批样品按中国药典[1]中的紫外分光光度法进行测定,结果平均标示量分别为101.3%、101.8%、98.6%,RSD分别为1.36%、1.82%、1.90%(n=6);与HPLC法的测定结果比较,2种方法之间差异没有显著性。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京:化学工业出版社，2005:585-586.
[2] 殷国真,韩加怡.高效液相色谱法测定定喘止咳胶囊中三组分的含量[J].现代应用药学,1995,12(2):56-57.
[3] 邹定,吴学军,南国柱.毛细管区带电泳测定复方氯丙那林片中3种药物含量[J].中国药学杂志,1998,33(6):360-362.
[4] 叶隽,陈斌.HPLC法测定盐酸溴己新片的含量及溶出度[J].药学服务与研究，2006，6(2)：148-149.
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