简析清肺抑火片质量标准研究

简析清肺抑火片质量标准研究

　　【摘要】：目的 建立清肺抑火片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对清肺抑火片处方中苦参、黄柏、前胡进行了定性鉴别;采用高效液相色谱法测定处方中黄芩苷的含量。采用ODS色谱柱;流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2);流速：1 mL/min;柱温25 ℃;检测波长：280 nm。结果 本品定性鉴别薄层色谱特征明显，专属性强;黄芩苷的线性范围为0.163～0.975 μg，r=0.999 9，平均回收率97.43%，RSD=1.97%(n=6)。结论 该方法重现性好，简单，可有效控制清肺抑火片的质量。

　　【关键词】清肺抑火片　苦参　前胡　黄柏　黄芩苷　质量标准

　　Abstract：Objective To establilsh the quality standard for Qingfei Yihuo tablet. Methods TLC was performed to identify Sophora flavescens Ait， Peucedani and Cortex Phellodendri. HPLC was used to determine Baicalin. ODS column was used. The mobile phase consisted of methanol-water-phosphoric acid (47∶53∶0.2). The flow rate was 1.0 mL/min and column temperature was at 25 ℃. The detecting wave length was at 280 nm. Results The characteristic for identification by TLC was distinct and hightly specific. Baicalin could be determined by HPLC. The linearity of Baicalin was good in the range of 0.163～0.975 μg (r=0.999 9). The average recovery of Baicalin was 97.43% and RSD was 1.97% (n=6). Conclusion The methods of identification and quantification is simple and reproducible. It can be used effectively for the quality control of Qingfei Yihuo table.

　　Key words：Qingfei Yihuo tablet;Sophora flavescens Ait;Peucedani;Cortex Phellodendri;Baicalin;quality standard

　　清肺抑火片由黄芩、栀子等9味中药组成，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》第二册(WS3-B-0418-90)[1]。具有清肺止嗽、降火生津的作用，用于肺热咳嗽、痰延壅盛、咽喉肿痛、口鼻生疮、牙齿疼痛、牙龈出血、大便干燥、小便赤黄。原部颁标准无鉴别和含量测定项，不能全面反映制剂的质控要求。已报道的有对方中黄芩、栀子、大黄的薄层鉴别[2]，本试验对处方中其余药味中的苦参、黄柏、前胡进行了薄层鉴别研究，以更全面反映该制剂的质量。清肺抑火片质量标准研究该制剂主要药味为黄芩，黄芩苷是其主要有效成分，对黄芩苷进行含量测定，可以进一步完善和提高清肺抑火片的质量标准。

　　1、仪器与试药

　　Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent 1100化学工作站，DAD二级管阵列检测器;ODS C18色谱柱(10 μm，250 mm×4.6 mm);定量毛细管(U.S.A.Drummond);939型薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);CX-150型超声波清洗机(北京天海双龙医疗设备有限公司)。

　　盐酸小檗碱(批号713-9906)、苦参碱(批号0805- 200005)、黄芩苷对照品(批号110715-200212)，及苦参(批号121019-200304)、黄柏(批号120937-200305)和前胡(白花前胡)对照药材(批号120951-200003)均购于中国药品生物制品鉴定所;清肺抑火片(山西振东制药公司，批号20070401、20070402、20070403)。硅胶G、GF254(青岛海洋化工有限公司);甲醇为色谱纯;水为蒸馏水;磷酸为分析纯。

　　2、薄层色谱鉴别

　　2.1 苦参

　　取清肺抑火片5片，研细，加浓氨试液3 mL、三氯甲烷50 mL，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取苦参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取苦参碱对照品，加乙醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例和制备方法制备缺苦参的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验[3]，吸取上述供试品溶液2 μL，对照药材溶液10 μL，对照品溶液8 μL，阴性对照溶液2 μL，分别点于同一用2%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)为展开剂，进行第1次展开，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2∶4∶2∶1)10 ℃以下放置的上层溶液进行第2次展开，两次展距均为8 cm，以稀碘化铋钾为显色剂。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的橙色斑点，阴性无干扰。

　　2.2 黄柏

　　取清肺抑火片1片，研细，加甲醇10 mL，加热回流30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材50 mg，加甲醇5 mL，同法制成对照药材溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。再按处方比例和制备方法制备缺苦参的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水(10∶6∶1∶1)为展开剂，置氨蒸气预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。

　　2.3 前胡

　　取清肺抑火片10片，研细，加三氯甲烷40 mL，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取前胡对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再按处方比例和制备方法制备缺前胡的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成缺前胡的阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。

　　3、含量测定

　　3.1 色谱条件

　　色谱柱：ODS C18(10 μm，250 mm×4.6 mm);流动相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2);检测波长280 nm;流速：1 mL/min;柱温25 ℃;理论塔板数按黄芩苷峰计算不得低于2 500。

　　3.2 溶液的制备

　　对照品溶液的制备：精密称取在60 ℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含黄芩苷60 μg的溶液，即得。

　　供试品溶液的制备：取本品10片，除去薄膜衣，研细，取细粉约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

　　阴性对照溶液的制备：取除黄芩以外的其余药味，按制备工艺制备不含黄芩的样品，按供试品溶液制备方法制成不含黄芩的阴性对照溶液。

　　3.3 测定法

　　分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

　　3.4 线性关系的考察

　　制备浓度为65 μg/mL的黄芩苷甲醇溶液，微孔滤膜滤过，依次进样2.5、5、7.5、10、15、20 μL，对所得峰面积和各对照品进样量作回归处理，得黄芩苷标准曲线，并计算得黄芩苷回归方程：Y=2 734.336 24X-4.427 33，r=0.999 9。结果表明，黄芩苷的量在0.163～0.975 μg线性范围良好。

　　3.5 精密度试验

　　取同一批号样品溶液，重复进样6次，每次10 μL。结果供试品中，黄芩苷峰面积积分值RSD=0.8%(n=6)，表明仪器精密度良好。

　　3.6 重现性试验

　　取同一批样品(批号20070401)，分别按供试品溶液制备方法制备5份样品，照上述色谱条件测定，测得黄芩苷的平均含量19.48 mg/g，RSD=1.35%(n=5)。

　　3.7 稳定性试验

　　取同一批号样品溶液，每隔2 h进样1次，每次10 μL，进样6次，结果6次含量RSD=2.27%，表明样品溶液在10 h内基本稳定。

　　3.8 回收率试验

　　取已知含量的清肺抑火片样品(批号20070401)6份，分别添加黄芩苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法制成供试溶液，依法测定，结果平均回收率97.43%，RSD=1.97%，见表1。表1 回收率测定结果(略)

　　3.9 样品的含量测定

　　按上述方法测定3批样品中黄芩苷的含量，每份平行测定3次，结果见表2。表2 样品的含量测定结果(略)

　　3.10 阴性干扰试验

　　取阴性对照品溶液，按黄芩苷含量测定项下的方法进行测定。结果供试品色谱图中，在与黄芩苷对照品色谱峰相应的位置上，没有色谱峰出现，表明处方中其它药味对其测定无干扰[4]。结果见图1。

　　4、讨论

　　方中黄柏、前胡的薄层色谱具有荧光特性，无须喷显色剂， 3，5-二硝基水杨酸比色法测定可以快速进行定性鉴别。鉴别前胡时，溶剂系统的极性需要适当调整，方能显出荧光斑点。实验过程试用了3∶1、3∶2、1∶1的石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯[3，5]系统，结果斑点重叠;改用三氯甲烷-乙酸乙酯系统时，供试品斑点能明显分开，此系统调节比例为19∶1时，展距适中，斑点清晰，达到较好的分离。对黄柏的鉴别应预先饱和，否则边缘效应严重，应先饱和10～20 min，再展开。苦参鉴别应注意显色剂及展距，展距为8 cm，分离度适中，显色剂为稀碘化铋钾时，色谱斑点清晰;若显色剂为碘化铋钾，则背景重，色谱斑点效果一般。

　　黄芩苷是黄芩的主要有效成分，上述含量测定条件为2005版《中华人民共和国药典》(一部)黄芩项下的含量测定方法，复方制剂在此条件下，黄芩苷与其它峰能够很好的分开，无需调整流动相的极性，便可进行定量研究。本方法操作简单，结果可靠，可用于该制剂的质量控制，进一步完善了该制剂的质量标准。

　　【参考文献】

　　[1] 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂[S].第2册.1990. 248.

　　[2] 李玉仿.清肺抑火片的薄层分析[J].天津药学，2002，14(2)：66.

　　[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.141.

　　[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集[M].广州：广东科技出版社，1993.57.

　　[5] 苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000.89.

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