中药预防流感的作用与黏膜免疫相关性探讨
【摘要】目的探讨中药在预防流感中的作用和黏膜免疫的相关性。方法选用BALB/c小鼠120只，分成A、B两组，A组分为六小组，每组10只，分别为是空白组(使用生理盐水)、银翘散制剂组、冰香散滴鼻组、玉屏风散制剂组、冰香散雾化组、利巴韦林组。连续给药12d后处死小鼠，分离血清，收集每只小鼠的鼻咽冲洗液、肠道冲洗液以及支气管肺泡灌洗液，然后使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其免疫球蛋白A(IgA)的含量，空白组的小鼠称体重和肺重，测定肺指数。B组同样分为6组，每组10只小鼠，对应每组分别是病毒对照组、银翘散制剂组、冰香散滴鼻组、玉屏风散制剂组、冰香散雾化组、利巴韦林组。给药1周后对照组小鼠感染15LD50流感病毒，使用滴鼻感染的方式，感染后连续给药5d，1次/d，感染5d后处死小鼠，同样每只小鼠称体重并测定肺指数，分离血清，收集每只小鼠的鼻咽冲洗液、肠道冲洗液以及支气管肺泡灌洗液，然后使用ELISA检测其IgA的含量。结果在对流感病毒所感染的小鼠产生的抑制作用方面，银翘散制剂组、利巴韦林组与病毒组相比差异有统计学意义(P<0.05);在对正常小鼠黏膜免疫产生的影响方面，银翘散制剂组小鼠血清中IgA含量明显较空白对照组高，差异具有统计学意义(P<0.05);利巴韦林组小鼠支气管-肺泡内sIgA较空白组下降明显(P<0.05)。在对流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影响方面，利巴韦林组小鼠血清中IgA含量明显较对照对要高(P<0.05)。结论中药预防流感和黏膜免疫具有相关性。
【关键词】流感;黏膜免疫;免疫球蛋白A;中药
流感是有流感病毒引起的一种呼吸道传染病，病毒首先接触呼吸道的黏膜，这样黏膜就成了阻止病毒入侵的第一道防线，黏膜内的免疫细胞分泌的IgA能与病毒结合，阻止病毒入侵。中医药在预防流感上具有悠久的历史，其给药方式主要有口服、佩戴和烟熏等[1]。本研究旨在利用小鼠模型来探讨重要预防流感的作用和黏膜免疫的一些相关性。
1、材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物6周大雌性BALB/c小鼠120只，SPF级，购于上海市实验动物中心。
1.1.2实验试剂和器材乙醚、小鼠ELISA试剂盒、利巴韦林;医用的超声雾化器、灭菌锅、医用的净化工作台、电子分析天平纯水仪、酶标仪、低温冰箱等。
1.1.3实验所用药物银翘散制剂、冰香散、玉屏风散制剂、利巴韦林。
1.1.4实验所用病毒株甲型流感病毒(H1N1)鼠肺的适应株是购于中国医学科学院医药生物技术研究所，本研究所病毒室冷冻保存。
1.2实验方法A组：60只小鼠随机分成六组，每组10只，分别为空白组(使用生理盐水)、银翘散制剂组、冰香散滴鼻组、玉屏风散制剂组、冰香散雾化组、利巴韦林组。针对不同的预防方药使用口服、滴鼻和雾化吸入的方式。给药1次/d，共计12d。给药的剂量分别为银翘散制剂口服40g/kg，冰香散滴鼻组0.03g/kg，玉屏风散制剂组60g/kg，冰香散雾化组0.6g/kg，利巴韦林组口服100mg/kg。给药12d后处死小鼠，收集血清、鼻咽冲洗液、支气管肺泡冲洗液以及肠道冲洗液后ELISA检测IgA的含量。空白组小鼠称体重、肺重，测定肺指数。B组：给药量与A组相同。对照组小鼠在乙醚麻醉后采用滴鼻感染的方式感染15LD50病毒液，每只小鼠约0.05ml，在给药1周后攻击感染，感染5d后处死，称体重和肺重，测定肺指数。收集血清、鼻咽冲洗液、支气管肺泡冲洗液以及肠道冲洗液后ELISA检测IgA的含量。
1.3统计学方法采用SPSS20.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(x-±s)表示，采用t检验;计数资料以率(%)表示，采用χ2检验。显著性检验取α=0.05。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2、结果
2.1不同中药对流感病毒所感染的小鼠产生的抑制作用通过实验，空白组小鼠的肺重为(0.15±0.02)mg，肺重指数(0.72±0.06)g/g，肺指数的抑制率0;病毒对照组小鼠的肺重为(0.23±0.04)mg，肺重指数(1.62±0.36)g/g，肺指数的抑制率0;银翘散制剂组的肺重为(0.20±0.05)mg，肺重指数(1.04±0.43)g/g，肺指数的抑制率35.45%;利巴韦林组的肺重为(0.18±0.04)mg，肺重指数(1.09±0.41)g/g，肺指数的抑制率33.10%。统计可知，病毒对照组与空白组比较发现小鼠肺重明显增加，肺指数明显上升，差异有统计学意义(P<0.05)。银翘散制剂、利巴韦林作用后小鼠肺指数的`抑制率在25.48%～41.62%。银翘散制剂组、利巴韦林组与病毒对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2不同中药对正常小鼠黏膜免疫产生的影响研究结果显示，连续12d给药后，空白组血清IgA为(1.81±0.35)g/L，鼻烟sIgA为(0.86±0.47)g/L，支气管-肺泡sIgA为(13.12±2.48)g/L，肠道sIgA为(24.89±20.79)g/L;银翘散制剂组血清IgA为(5.58±1.52)g/L，鼻烟sIgA为(0.91±0.85)g/L，支气管-肺泡sIgA为(13.72±2.78)g/L，肠道sIgA为(38.59±28.48)g/L;利巴韦林组血清IgA为(2.31±1.15)g/L，鼻烟sIgA为(0.53±0.25)g/L，支气管-肺泡sIgA为(7.45±1.69)g/L，肠道sIgA为(25.15±20.35)g/L。
银翘散制剂组小鼠血清中IgA含量明显较空白组要高，且差异具有统计学意义(P<0.05)，由此可知银翘散制剂给药方式都能提升小鼠的免疫力。利巴韦林组小鼠支气管-肺泡内sIgA较空白组下降明显，差异有统计学意义(P<0.05)。
2.3不同预防中药对流感病毒感染小鼠黏膜免疫功能的影响病毒对照组血清sIgA为(1.75±0.43)g/L，鼻烟sIgA(0.35±0.15)g/L，支气管肺泡sIgA为(8.15±1.71)g/L，肠道sIgA为(90.25±47.10)g/L;银翘散制剂组血清sIgA为(1.93±0.35)g/L，鼻烟sIgA(0.37±0.25)g/L，支气管肺泡sIgA为(8.98±1.21)g/L，肠道sIgA为(89.89±32.10)g/L;利巴韦林组血清sIgA为(1.11±0.37)g/L，鼻烟sIgA(0.31±0.15)g/L，支气管肺泡sIgA为(4.41±1.21)g/L，肠道sIgA为(72.35±23.89)g/L。结果显示利巴韦林组小鼠血清中IgA含量明显较病毒对照组要高，差异有统计学意义(P<0.05)。利巴韦林则显著降低了支气管-肺泡内sIgA的分泌。
3、讨论
病毒入侵时，机体的第一道屏障是黏膜，而黏膜免疫反应中其主要作用的就是IgA。流感病毒入侵机体往往是通过呼吸道黏膜，因此，呼吸道黏膜在抵抗流感的过程中起着举足轻重的作用，呼吸道黏膜分泌的分泌型IgA-sIgA的多少决定了机体对流感的抵抗力大小[2]。
研究表明中药对流感的预防有着很好的疗效[3]。本研究结果表明银翘散制剂、冰香散、玉屏风散、冰香散作用后小鼠的肺指数明显改善，都能够很好的预防流感，并在一定程度上减轻感染鼠肺后的病变程度。利巴韦林给药能够抑制黏膜分泌IgA，不宜作为流感预防用药。口服、佩戴和烟熏三种中药给药的方式都可以作用于消化道和呼吸道黏膜，使黏膜分泌IgA。因此，中药预防流感的作用和黏膜免疫具有一定的相关性。
参考文献：
[1]孙翠娥，杨笃然，丁正琪，等.中草药烟熏对空气消毒及预防呼吸道传染病作用的研究.现代生物医学进展，2007，7(12)：1884-1885.
[2]徐培平，丁伟，赵昉，等.中药预防流感作用与黏膜免疫相关性研究.中国免疫学杂志，2012，28(11)：992-998.
[3]苏惠萍，沈蔷，武维屏，等.中医预防方案干预社区流感的随机对照研究.北京中医药大学学报，2010，33(10)：690-694.
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