香连素片质量标准研究论文

香连素片质量标准研究论文

　　香连素片是广东万年青制药无限公司的产品，具有清热燥湿、行气止痛的成效，临床用于干冷型痢疾、里急后重、腹痛泄泻。本文是一篇香连素片质量规范研讨，让我们一同来看看详细内容吧!

　　【摘要】 目的 树立香连素片的质量控制规范。办法 采用薄层色谱法鉴别香连素片中的木香;采用高效液相色谱法测定香连素片中盐酸小檗碱的含量。后果 在薄层色谱中检出了木香;盐酸小檗碱的进样量在0.0378～0.378 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7)，均匀回收率爲101.49%，RSD爲1.97%(n=6)。结论 本办法专属性强、精确、重现性好，可作爲香连素片的质量控制规范。

　　【关键词】 香连素片;木香;薄层色谱法;盐酸小檗碱;高效液相色谱法

　　香连素片是广东万年青制药无限公司的产品，具有清热燥湿、行气止痛的成效，临床用于干冷型痢疾、里急后重、腹痛泄泻。其处方爲木香500 g、盐酸小檗碱75 g。原药品规范[1]鉴别木香用试管反响，盐酸小檗碱的含量用紫外分光光度法测定，办法专属性较低且影响要素多。本文采用薄层色谱法鉴别木香、高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，后果标明操作简便、精确、反复性好，爲该种类的质量规范进一步修订提供了根据。

　　一、仪器与试药

　　1.1 试药

　　香连素片(批号：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603)均爲广东万年青制药无限公司产品;木香对照药材(批号：921-9201)及盐酸小檗碱对照品(批号：110713-200609)均购自中国药品生物制品检验所;硅胶G预制板及硅胶G均由青岛陆地化工厂消费;乙腈爲色谱纯;其他试剂与试药均爲剖析纯。

　　1.2 仪器

　　LC?2010A高效液相色谱仪(日本岛津), UV?2501PC紫外分光光度仪(日本岛津), CQ?15A超声波清洗器(上海跃进医用光学器材厂)。

　　二、薄层鉴别

　　取本品2片，研成细粉，加三氯甲烷10 mL，超声(功率120 W，频率50 Hz)处置30 min，滤过，滤液稀释至2 mL，作爲供试品溶液。另取木香对照药材0.2 g、不含木香的阴性样品，同法辨别制成对照药材溶液及阴性对照溶液。照薄层色谱法实验，汲取上述3种溶液各3 μL，辨别点于同一以羧甲基纤维素钠爲黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷?环己烷(体积比5∶1)爲展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点明晰。置可见光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的地位上，显相反颜色的斑点。阴性对照无搅扰，见图1。

　　三、含量测定

　　3.1 色谱条件

　　色谱柱：phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5 μm) 活动相：以磷酸盐缓冲溶液[0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.01 mol/L十二烷基磺酸钠(体积比1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(体积比60∶40)，用磷酸调理pH值至3.0爲活动相;流速：1.2 mL/min，检测波长：266 nm，柱温：室温，进样量：10 μL，实际塔板数不低于1500。

　　3.2 溶液的制备

　　3.2.1 对照品溶液的制备

　　取盐酸小檗碱对照品过量，精细称定，加乙醇制成每1 mL含120 μg的溶液，作爲对照品溶液。

　　3.2.2 供试品溶液的制备

　　取本品20片，精细称定，研细，精细称取过量(约相当于盐酸小檗碱60 mg)，置索氏提取器中，加盐酸?甲醇(体积比1∶100)过量，加热回流提取至提取液无色，将提取液(必要时稀释)移至50 mL量瓶中，用大批盐酸?甲醇(1体积比∶100)的混合液洗濯容器，洗液并入提取液中，并浓缩至刻度，摇匀，精细量取1 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，即得。

　　3.2.3 阴性对照溶液的制备

　　依照本品的处方、制法制备短少盐酸小檗碱的模仿样品，按“3.2.2”项办法制成阴性对照溶液。

　　3.3 专属性实验

　　辨别取供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，按上述色谱条件测定，后果阴性对照对盐酸小檗碱测定无搅扰，阐明办法专属性强。后果见图2。

　　3.4 线性关系的调查

　　精细称取盐酸小檗碱对照品过量，用乙醇溶解制成质量浓度爲37.8 μg/mL的溶液，辨别精细汲取1、2、4、6、8、10 μL注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以进样量(m)爲横坐标，色谱峰面积积分值(Y)爲纵坐标，绘制规范曲线，经线性回归，得线性回归方程爲Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.999 7，标明盐酸小檗碱进样量在0.0378～0.378 μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。

　　3.5 波动性实验

　　精细汲取同一批供试品溶液各10 μL，按上述色谱条件，每隔1 h测1次峰面积，后果标明盐酸小檗碱在24 h内波动，RSD爲0.66%。

　　3.6 反复性实验

　　取同一批样品共6份，辨别按“3.2.2”项下办法停止制备溶液，并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，后果RSD=0.90%,标明办法重现性良好。

　　3.7 回收率实验

　　精细称取已知含量的样品(批号：030802)共6份，辨别精细参加对照品过量，按“3.2.2”项下办法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算参加量的回收率。后果见表1。表1 盐酸小檗碱加样回收率实验(略)

　　3.8 精确度调查

　　以含量限制上限的50%爲范围低限、以含量限制下限的150%爲范围高限，调查测定范围的精确度。

　　精细称取已知含量的样品(批号：030802)，按含量范围高、低限折算取样量，各6份，辨别精细参加对照品过量，按“3.2.2”项下办法制备溶液并按上述色谱条件测定盐酸小檗碱的含量，计算参加量的回收率。后果见表2。表2 精确度实验后果(略)

　　3.9 样品的测定

　　取10批样品，辨别按“3.2.2”项下办法制备溶液，辨别精细量取供试品溶液及对照品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，并按上述色谱条件，测定盐酸小檗碱的含量，后果见表3 。表3 样品中盐酸小檗碱的含量(略)

　　四、讨 论

　　4.1 采用薄层色谱法鉴别木香时,辨别采用自制板及预制板同时展开、预均衡与未均衡的条件展开，层析后果标明：自制板与预制板的层析后果无差异，两种展开条件均可检出木香特征斑点，但以未均衡的条件展开，后果容易发生边缘效应，故展开时预均衡10 min较好。

　　4.2 薄层层析的环境影响

　　辨别在冰箱、室温、绝对湿度45%和75%的环境条件下展开，后果标明：在上述环境条件展开，均可检出木香特征斑点，差别不大，故选用以室温、绝对湿度45%～75%爲展开环境条件，操作简便。

　　4.3 提取办法的选择

　　参照国度药品规范[1]，供试品溶液的制备是经索氏提取后上氧化铝柱洗脱，操作较繁琐。我们对提取办法停止了优化，只经索氏提取后间接测定，并与原提取办法的HPLC测定后果作比照。后果标明：只经索氏提取与原提取办法的测定后果分歧，因而样品的提取采用索氏提取法。

　　4.4 测定波长的选择

　　取对照品溶液， 在200～500 nm波长范围内停止扫描，在349、266、231 nm均有最大吸收，经HPLC实验比拟，盐酸小檗碱在266 nm波长的峰面积值最大，故选择检测波长爲266 nm。

　　4.5 活动相的选择

　　参考文献[3,4]，采用磷酸盐缓冲溶液[0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.01 mol/L十二烷基磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40),辨别用磷酸调理pH值至3.0、3.2、3.5爲活动相，经实验，当活动相的pH值爲3.0时对照品及样品的峰形对称，反复性好，阴性对照无搅扰，故确定活动相爲磷酸盐缓冲溶液[0.05 mol/L磷酸二氢钾和0.01 mol/L十二烷基磺酸钠(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40)，用磷酸调理pH值至3.0。

　　4.6 耐用性调查

　　4.6.1 柱温的调查

　　柱温辨别爲室温、40 ℃时，色谱峰的别离度、峰形及峰面积根本分歧，故以室温作爲柱温，操作较简便。

　　4.6.2 流速的调查

　　辨别设定流速爲1.0、1.2及1.5 mL/min停止测定，后果标明：当流速爲1.0 mL/min时保存工夫太长，当流速辨别爲1.2及1.5mL/min时色谱峰的峰形及峰面积无甚差异，且前者的保存工夫短一些，故选择流速爲1.2 mL/min。

　　4.6.3 色谱柱的调查

　　选用3种不同厂牌的色谱柱：phenomenex C18 (150 mm×4.60 mm,5 μm)、DiamonsilTM C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)和 Spherisorb C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)，测定同一批样品(批号：060602)的含量，后果3种色谱柱测得含量的RSD=0.61%(n=2)，标明换用不同厂牌的色谱柱，均可失掉称心的色谱图，故本法的耐用性好。

　　【参考文献】

　　[1]WS3—B—2572—97.国度药品规范:卫生部药品规范第十三册[S].1997:140.

　　[2]国度药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版一部[S].北京：化学工业出版社，2005：41.

　　[3]庞小雄，宋粉云，钟兆健，等.HPLC法测定拈痛丸中盐酸小檗碱的含量[J].广东药学院学报，2007,23(3):240-242.

　　[4]张宇烽，马安霓，陈小玲，等.HPLC法测定芩连葛根片盐酸小檗碱的含量[J].广东药学，2004，14(7)：83.

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