简析益气活血片对人工寒潮诱发脑卒的影响论文

简析益气活血片对人工寒潮诱发脑卒的影响论文

　　脑卒中是当今严重危害人类健康的三大疾病之一， 具有发病率高， 病死率高， 致残率高等特点。脑梗死是脑血管病的主要类型。随着社会老龄化进程的加快， 脑梗死的发病率和病死率都将会进一步提高，因此研究如何防治脑梗死具有临床意义。目前研究认为在脑梗死的发病机制中， 血纤溶系统与凝血系统的功能状态起着重要的作用。本研究从调节机体凝血和纤溶系统功能平衡的作用出发， 观察益气活血片对人工寒潮诱发大鼠脑卒中的影响， 为临床治疗脑梗死提供理论依据， 现报道如下。

　　1 对象与方法

　　1. 1 实验动物

　　SPF 级SD 纯种雄性大鼠80 只，体质量80 ～ 120 g， 购自广州中医药大学大学城实验动物中心， 许可证号(广东省实验动物检测所检测)： SCXK (粤) 2008-0020， 采用广州中医药大学动物中心的常规饲料和蒸馏水喂养。

　　1. 2 主要试剂与仪器

　　ALC-NIBP 无创血压测量分析系统(上海奥尔科特生物科技有限公司) ;LRH-XXX-GSI 型气候箱(韶关市泰宏医疗器械有限公司); 拜阿斯匹林肠溶片(拜耳医药保健有限公司， 批号： BJ08409); ActichromeTAFI 活性试剂盒(American Diagnostic Inc); 蛋白C 活性发色底物法试剂盒(上海船夫生物技术有限公司)。

　　1. 3 药物

　　益气活血片组成： 黄芪1 000 g， 益母草150 g， 当归90 g， 川芎90 g， 全蝎90 g， 石菖蒲90 g， 冰片10 g。由广州中医药大学第三附属医院制剂室提供。

　　1. 4 高血压模型复制

　　采用双肾双夹法复制易卒中型肾血管性高血压性大鼠模型[2]。具体方法： 采用100 mg/L 水合氯醛(300 mg/kg) 腹腔麻醉， 备皮， 清洁消毒， 铺孔巾， 沿剑突下1 ～ 2 cm 部位向下划开2 ～ 3 cm 的切口， 依次打开腹腔， 先定位左侧肾脏， 再定位右侧肾脏， 自制小夹钳夹双侧肾动脉， 回纳胃肠于腹中合适位置， 依次缝合， 独立饲养1 d。采用ALC-NIBP 无创血压测量分析系统经尾动脉测定大鼠收缩压， 造模后每周测量1 次， 并正确记录血压值， 造模成功标准为血压峰值达到并稳定在20 kPa 以上。

　　1. 5 人工寒潮模拟

　　采用LRH-XXX-GSI 型气候箱模拟自然寒潮， 依据本省气象局的规定标准， 达到以下条件即可认为寒潮来临： ①在24 h 内平均温度骤然下降8℃或以上; ②48 h 内平均温度降低10℃或以上; ③同时整个过程最低温度≤5℃。在造模术后112 d 高血压大鼠已到达高血压晚期， 将4 组大鼠分别置于人工气候箱中， 在温度22℃、相对湿度65%的状态下饲养12 h， 再将温度设置为4℃、相对湿度不变， 12 h 为1 d 循环， 共3 d。

　　1. 6 实验分组与给药

　　在高血压造模术前随机抽取20 只大鼠作为空白对照组; 在高血压早期即造模术后14 d 将高血压模型大鼠随机分为3 组开始给药。益气活血片组以1.89 g·kg-1·d-1 剂量灌胃(益气活血片用量按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值表计算); 阿斯匹林组以拜阿斯匹林肠溶片溶于5 g/L 羧甲基纤维素钠中， 制成悬浊液，用时摇匀， 剂量为80 mg·kg-1·d-1; 模型组以蒸馏水2 mL 灌胃， 1 次/d; 空白对照组自由饮用蒸馏水。4 组大鼠连续灌服至造模术后112 d。

　　1. 7 观察指标

　　1. 7. 1 体质量、血压测定大鼠体质量采用电子秤测定; 大鼠血压采用ALC-NIBP 无创血压测量分析系统测定。

　　1. 7. 2 凝血和纤溶体系检测在寒潮后从每组中抽取实验大鼠， 以水合氯醛(100 mg/L， 300 mg/kg)麻醉大鼠后， 消毒备皮， 从右心房或下腔静脉取血1～3mL， 放入枸橼酸钠试管(0.109 mmol/L， 0.11 mL)抗凝， 将离心机温度设置为4℃， 开始离心。血浆凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI) 用1 500 r/min 离心15 min， 蛋白C (PC) 用3 000 r/min 离心10 min，凝血酶—抗凝血酶复合物(TAT) 采用2 000 r/min离心10 min， 纤溶酶(PAP) 采用5 000 r/min 离心10 min， 移液器收集上清液， -80℃保存， 3 个月内测试。血浆TAFI、PC 水平采用发色底物法检测。血浆TAT、PAP 水平采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测。甲醇、乙醇等试剂均为分析纯试剂。

　　1. 8 统计方法

　　采用SPSS 13.0 软件进行统计处理。计量资料以均数± 标准差(x ± s) 表示， 多组比较采用方差分析， 先行方差齐性检验， 方差齐，采用q 检验; 方差不齐， 则采用秩和检验。

　　2 结果

　　2. 1 各组大鼠血压结果显示： 治疗前中药组、模型组、阿司匹林组血压均较空白对照组显著升高(P<0.05); 治疗后中药组血压较模型组显著降低(P<0.05)。

　　2. 2 凝血和纤溶系统变化结果显示： 模型组血浆TAFI、PC、TAT、PAP 水平较空白对照组均显著升高(P<0.05) ; 中药组可显著降低血浆TAFI、PC、TAT、PAP 水平， 与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。

　　3 讨论

　　TAFI 和PC 是凝血、纤溶反应中一对重要因子， 两者与脑卒中发病的关系已被广泛研究。TAT 的升高是体内高凝血状态的标记， 而PAP 的升高是体内高纤溶状态的标记。人工寒潮时， 高血压大鼠内环境发生剧烈变化， 凝血/抗凝系统、纤溶/抗纤溶系统平衡可被打破， 当机体状态趋向于有利凝血发生如血压下降、血液浓缩等情况时，某一血管局部凝血启动引起血栓形成或梗死。在高血压大鼠血管病变如管壁透明变性、纤维素样坏死和微动脉瘤形成等血管薄弱部位， 当纤溶活性增强损伤血管内皮和基底膜， 血压突然升高时更易出现血管破裂出血。因此， 寒潮时血浆中TAFI、PC、TAT、PAP 水平升高提示梗塞或出血的危险性增加， 可能与中风事件如脑梗死或脑出血的发生有一定关系。

　　祖国医学认为， 久病正虚， 正气不足， 血脉运行无力， 气血运行不畅， 血脉瘀滞， 血外渗而为水， 水停而为痰， 痰瘀搏结， 遇风引触， 风痰瘀血闭阻脉络而发为中风。因此扶正以抗邪， 也就成为了预防中风病发病的重要方法。而益气活血法是临床治疗中风的常用之法。益气活血片由黄芪、当归、石菖蒲、川芎、全蝎、益母草、冰片等药物组成， 有益气养血、活血涤痰的作用。中药药理研究表明： 组方内药物具有提高神经元的抗损伤能力、预防神经元尼氏体损伤、改善神经功能缺损的症状等作用。前期研究亦证实益气活血片能降低脑梗塞模型大鼠血小板黏附分子的高表达状态。本研究结果表明： 益气活血片组经历寒潮后血浆TAFI、PC、TAT、PAP水平较模型组显著降低， 差异均有统计学意义。表明益气活血片可能通过激活体内抗凝系统、纤溶系统，降解交联纤维蛋白， 刺激血管内皮细胞释放NO 以抑制血小板聚集、白细胞黏附， 保护血管内膜以及抑制和/或减轻静脉血栓形成后的炎症反应等途径， 降低人工寒潮促发脑卒中的机率， 达到防治脑卒中目的，确切机制有待进一步研究。

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