焦炉工血清p53蛋白的检测分析
【摘要】 目的 探讨职业接触焦炉逸散物的焦炉工人血清p53蛋白的表达水平及其在肺癌高危人群筛检中的意义。方法 运用蛋白质印迹技术（Westernblot），对接触组118例和对照组50例人群的血清p53蛋白进行检测，比较两组血清p53蛋白的表达水平。结果 接触组不同工龄组、不同作业地点间p53蛋白的表达水平具有统计学意义（P﹤0?05）。结论 经常大量接触焦炉逸散物可使p53蛋白的表达水平升高，增加p53基因异常的危险性，从而使焦炉工患肺癌的危险性增加。
【关键词】 焦炉逸散物；蛋白免疫印迹；p53蛋白
【Abstract】 Objective Serum p53 protein overexpression was detect in coke oven workers to explore the biomarker of early diagnosis of lung cancer.Methods Western blot was used for determing the level of p53.Serum p53 were compared between two groups. Results Compared with the control group, p53 levels in the different exposed group and different operating points increased significantly（P<0?05）,and the expression of p53 increased gradually in the exposed group with years of service. Conclusion The results suggested that coking oven emissions (COE) were likely to cause mutation of p53 gene and increasing the incidence of lung cancer.
【Key words】 coking oven emissions (COE)， Westernblot， p53 protein
寻找和确定合适的早期监测指标一直是职业性肿瘤高危人群筛检的重要研究课题。新近发现抑癌基因p53与职业性肺癌密切相关，其改变可发生在癌变的早期阶段，并于血清中出现相应的蛋白产物［１］。多环芳烃职业接触者是肺癌发生的高危人群。本调查采用蛋白质印迹技术(Westernblot)检测多环芳烃职业接触者——焦炉工血清p53蛋白的表达情况，以探讨血清p53蛋白作为焦炉工早期筛查肺癌指标的意义。
1 对象与方法
1.1 研究对象 将某有限公司焦化厂炼焦车间的2004年3月在册职工（均为男性），按工龄分为3层，即﹤10年、10年～、20年～，再以等比例抽样法在各层抽取31、53、34人，共118人，组成接触组。对照组选自工作地点距该焦化厂3 000 m以外，且在3个月内未去过焦化厂的工厂男性医务人员50名组成对照，均未曾有任何职业致癌物接触史。
1.2 样本收集与处理 于清晨空腹采集每位调查对象的肘静脉血2 ml，不抗凝，2 000 r/min常温离心30 min，吸取血清至1.5 ml干净离心管中，并采用双缩脲法测定血清样品的总蛋白浓度，用双蒸水将样品浓度调至3.5 mg/ml，-20℃保存待测。
1.3 实验方法 Westernblot方法检测血清p53蛋白,按文献［２］的方法对p53进行蛋白质转? Ｆ渲幸豢褂猛每谷藀53多克隆抗体(0?5%Tris饱和盐水（TBS）按1∶500稀释，美国Santa Cruz公司)， TBS中洗膜5 min×3次。二抗为辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体(0.5% TBS按1∶400稀释，美国Sigma)， TBS中洗膜5 min×3次。二氨基联苯胺（DAB）显色5 min，大量双蒸水清洗3次终止显色。结果扫描保存，并用捷达801系列凝胶电泳图象分析系统分析p53蛋白水平 (单位:积分吸光度)。
1.4 统计分析 对实验室结果经核实确系无误后建立数据库，用SPSS10?0统计软件对焦炉工不同工龄组间、不同作业地点的p53蛋白表达水平进行单因素方差分析。
2 结果
2.1 研究对象的均衡性 118名焦炉工的平均年龄为（36.28±7.90）岁，50名对照组的平均年龄为（37?04±9?74）岁，接触组和对照组工人均为汉族；两组在年龄,经济水平分布上无显著性差异（t值分别为-0?528、1?637，P﹥0?05）,文化程度构成差异无显著性（χ2=2?633，P﹥0?05），可见两组均衡性较好。
2.2 生产环境空气中有毒物质检测结果 作业场所环境监测结果见表1 ，各测定地点粉尘和B［a］P浓度都远远高于国家卫生标准，以炉顶为最高。表1 焦炉作业区不同地点空气B［a］P、粉尘浓度
2.3.1 血清蛋白经SDS?PAGE电泳，应用考马斯亮蓝R250染色，按10 μl/道加样，蛋白量约为35 μg ，接触组在条带上明显高于对照组，见图1。Westernblot分析结果，根据与预染蛋白Marker分子量的比较，在62 kD和48 kD之间有单一条带即为p53。
2.3.2 不同工龄组与对照组血清p53表达水平比较：经检验，接触组与对照组p53蛋白的表达水平差异有统计学意义（P﹤0?05），见表2。表2 不同工龄组与对照组血清p53平均水平比较
3 讨论
Alian［３］的研究认为p53基因是环境和职业致癌作用的靶基因。COE的主要成分是多环芳烃化合物（PAHs），PAHs的主要致癌成分为苯并［ａ］芘，其最终活性产物能在p53基因的突变热点区域与DNA形成加合物，造成p53基因突变。如果p53基因发生突变，它所表达的p53蛋白的稳定性就会增加，在细胞内发生堆积，分泌到血液中，出现过量表达。由于p53蛋白可以分泌到血液中，所以检测血清p53蛋白可以反映体内p53基因表达的情况［４］，提示机体发生肿瘤可能性的大? ６苑伟└呶Ｈ巳旱难芯勘砻鳎?恍┚?＝哟ブ掳┪锏闹耙等巳海?缃哟ナ?蕖⒘で唷⒏醯墓と搜?錺53蛋白的过表达率要高于对照组非暴露人群［５］。炼焦工龄常是决定发病的重要因素，此次调查在不同工龄组p53的表达水平有显著性差异，随着工龄的增加，p53的表达量增加；不同作业地点p53的表达水平不同，炉顶工明显高于机侧工，有统计学意义（P﹤0?05），工龄和作业地点两方面结果反映了长期暴露于含有高浓度多环芳烃的作业环境,大量苯并［ａ］芘反复持续进入体内,造成组织细胞p53基因损伤,表现为部分暴露者血清p53蛋白水平异常增高。p53作为抑癌基因，其蛋白表达产物在细胞增殖过程中的过量表达，可作为肺癌高危人群的筛检指标，用于焦炉工职业病体检中，有利于焦炉工的健康监护，为煤焦沥青作业者的劳动保护提供科学依据。
【参考文献】
［1］ Sen E，Gonullu U，Akar N. The detection of quantitative serum p53 protein in lung cancer［Ｊ］. Tuberk Toraks,2005,53(3):231?237.
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［3］ Alian P. Selective targeting of p53 gene mutation hotspots in human by etiology:laiiy defined carcinogens［Ｊ］. Cancer Res,1991,51:185?189.
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［5］ Morris GF, Notwick AR, David O,et al.Development of lung tumors in mutant p53?expressing mice after inhalation exposure to asbestos［Ｊ］.Chest,2004 ,125(5):85?86.
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