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橡胶胶乳特异表达锌指蛋白基因分离、克隆及表达分析
论文摘要: 天然橡胶是产胶植物的一种次生代谢物,它具有耐高温、高弹性等突出优点,是合成橡胶不可比拟的一种世界性工业原料和重要的战略物资,具有极高的经济价值及应用前景.天（略）源于大戟科的巴西橡胶树(Hevea brasiliensis),目前有关巴西橡胶树形态、（略）培学等方面的研究已取得了较大的进展,产胶量也达到了一定的水平.但随着对天然橡胶需求的日益增长,如何进一步提高橡胶树的产胶量已成为天然橡胶行业亟待解决的重大课题,尤其在传统的技术与方法基础上,急待探索提高胶乳产量的新途径. 胶乳里存在着特异表达的基因,其中包（略）控因子,它们与橡胶生物合成和植物抗逆等密切相关.本研究旨在分离与克隆这些特异表达的转录调控因子,并研究它们在（略）下的表达情况,为探究其与橡胶合成相关基因之间的调控关系奠定基础.这对于进一步阐明橡胶生物合成的分子机制具有重要的意义,同时还能为橡胶树转基因高产抗逆育种的研究提供材料和理论依据. 本研究通过对橡胶叶与胶乳mRNA的提取,对其逆转录产物cDNA经Cy3、Cy5荧光染料标记后（略）交,杂交数据结果显示,在橡胶胶乳中上调表达显著的基因共有1...
Natural rubber, which （omitted）ct of secondary metabolite, is a very important industrial material. Its unique properties make it can not be replaced by a（omitted）tive synthetic materials. Hevea brasilien（omitted） most important plant producing natural rubber because of its higher yield and excellent quality. However, the （omitted）at there are some factors to limit the rubber production, which makes the yield（omitted） far behind the demand in industry. It is urgent to explore new approaches to im...
目录:摘要 第4-5页
Abstract 第5页
1 前言 第9-24页
·橡胶生物合成分子生物学研究进展 第9-12页
·橡胶生物合成分子生物学研究现状与不足 第9-10页
·激素对橡胶生物合成的调控及其分子生物学研究现状与不足 第10-11页
·橡胶转录因子研究现状与分析 第11页
·植物锌指蛋白与橡胶胶乳产生的关联性分析 第11-12页
·差异表达基因的筛选技术 第12-16页
·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 第12页
·RNA随机引物聚合酶链式反应(RAP-PCR) 第12-13页
·代表性差异分析(cDNA-RDA) 第13页
·抑制消减杂交(SSH) 第13-15页
·cDNA微阵列在检测表达差异基因中的应用 第15页
·基因表达序列分析(SAGE) 第15-16页
·应用拟南芥cDNA微阵列芯片研究非模式植物的转录谱 第16页
·锌指蛋白的研究进展 第16-22页
·锌指蛋白的结构 第17-18页
·锌指蛋白的分类 第18页
·锌指蛋白转录因子的调控机理 第18-19页
·与逆境胁迫相关的植物锌指蛋白 第19-22页
·与盐胁迫有关的锌指蛋白 第20页
·与冷胁迫有关的锌指蛋白 第20-21页
·与干旱胁迫有关的锌指蛋白 第21页
·与氧胁迫有关的锌指蛋白 第21页
·与强光胁迫有关的锌指蛋白 第21-22页
·本研究的目的和意义 第22-23页
·技术路线 第23-24页
2 材料与方法 第24-34页
·材料 第24-25页
·植物材料来源 第24页
·菌株和质粒 第24页
·生化试剂 第24页
·质粒载体 第24页
·工具酶及分子量标准 第24页
·试剂盒 第24页
·主要化学试剂 第24页
·芯片选择 第24页
·主要仪器设备 第24页
·引物列表 第24-25页
·方法 第25-34页
·利用cDNA微阵列筛选差异表达基因 第25-29页
·胶乳RNA的提取 第25-26页
·CTAB结合TRNzol~-A~+提取叶片总RNA 第26页
·RNA纯化 第26-27页
·RNA的琼脂糖凝胶电泳检测 第27页
·总RNA的浓度检测 第27页
·对样品RNA进行荧光标记(晶芯~(?)cRNA扩增标记试剂盒) 第27页
·杂交与清洗 第27-28页
·芯片扫描 第28页
·芯片图像的采集与数据分析 第28-29页
·生物信息学分析 第29页
·橡胶C3HC4型锌指蛋白基因的克隆 第29-32页
·橡胶基因组DNA的提取 第29-30页
·cDNA第一链合成 第30页
·PCR 第30页
·PCR产物的回收与纯化 第30-31页
·载体连接 第31页
·重组质粒的转化 第31页
·菌落PCR检测 第31-32页
·激素处理后的表达分析 第32-34页
·实验材料处理 第32页
·胶乳RNA的提取 第32页
·RT-PCR 第32页
·Real-Time PCR 第32-34页
3. 结果与分析 第34-49页
·胶乳特异表达基因的获得 第34-37页
·胶乳RNA和叶片RNA的提取 第34页
·基因芯片表达谱 第34-35页
·芯片杂交结果 第35-36页
·芯片结果分析 第36-37页
·四个锌指蛋白基因的克隆 第37-41页
·基因组DNA的质量检测 第38-39页
·基因克隆 第39-40页
·内含子分析 第40-41页
·四个锌指蛋白基因在激素刺激下的表达差异分析 第41-45页
·RNA质量检测 第41-42页
·real-time PCR结果 第42-45页
·锌指蛋白基因与橡胶转移酶基因的关联性分析 第45-49页
4. 讨论 第49-55页
·微阵列杂交种关键技术问题及解决方法 第49-51页
·k Aabidopsis Genome Array芯片说明 第49页
·芯片质量控制 第49-50页
·对弱杂交信号的处理 第50页
·芯片假阳性问题的处理 第50-51页
·微阵列杂交结果对研究橡胶代谢合成途径的价值 第51页
·橡胶DNA、RNA的提取 第51-52页
·关于荧光定量PCR的实验 第52-53页
·cDNA质量的检测 第53页
·关于激素作用下锌指蛋白的功能 第53-55页
5. 结论 第55-56页
参考文献 第56-62页
缩略词表 第62-63页
附录 第63-68页
致谢 第68页
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