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艾滋病的实验室检测流程
中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心继发布《全国艾滋病检测技术规范(2009 年版)》后，近日即将发布 2015 年版《全国艾滋病检测技术规范》，此规范堪称艾滋病检测实验室的「红宝书」，适用于疾病控制中心艾滋病确认实验室和医疗机构的艾滋病初筛实验室的 HIV 检测技术操作。下面是小编为大家带来的艾滋病的实验室检测流程的知识，欢迎阅读。
检测项目的样品种类
1 HIV 抗体检测：全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。
2 HIV 抗原检测：全血、血清、血浆、病毒培养上清液。
3 T 淋巴细胞亚群测定：EDTA 或肝素抗凝全血。
4 HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测：血浆、滤纸干血斑(DBS)。
5 HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养：淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞(PBMC)及全血。
当然，实验室最常用的仍然是血液标本，其他只作为补充样本。
HIV 抗体检测
HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目，在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。
1 初筛方法
(1)酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法，目前检测试剂已经发展到第四代，即同时检测血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗体，秉承「宁可错杀一千，不可漏网一个」的革命精神，其灵敏度远高于特异性，直叫 HIV 抗体无处遁形。
(2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA)
这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法，其采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体，用发光或荧光仪测定结果，其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高，同时带来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。
(3)快速检测(RT)方法
此类方法操作简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测，但灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法，但是经济实惠，也有一定的市场影响力。主要包括以下几种方法：明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤试验、免疫层析试验。
2 确认实验
(1)免疫印迹试验(WB)
WB 采用间接法检测样品中的抗 HIV-1/HIV-2 特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，经过一系列处理后，硝酸纤维素膜显示与特异抗原的结合的抗体条带，从而确诊抗体的存在。
(2)条带/线性免疫试验(RIBA/LIA)
实验原理基本同 WB 法，不再赘述。
HIV-1 抗原检测
1 筛查实验
(1)酶联免疫吸附实验(ELISA 法)：即第四代抗原抗体联合检测试剂盒。抗体包被固相反应孔(管)的底部，待测样本中 P24 抗原与包被抗体形成抗原抗体复合物，再加入酶(HRP)标记的 HIV-1 抗体与抗原结合，加底物显色，在酶标仪上读取结果。因同时检测抗原抗体，灵敏度大大提高，有效缩短了 HIV 感染的检测窗口期，但因试剂成本较高，在普通筛查实验室推广有一定难度。
(2)酶联荧光分析法(ELFA)：待测样品的 p24 抗原与包被在固相孔(管)内的 p24 抗体结合，并被生物素标记的 p24 抗体识别。临床实验室应用前景不明朗，需要荧光检测设备，成本较高。
(3)电化学发光法(ECLIA)：待测样品的 p24 抗原与包被抗体的磁性微粒和发光剂标记的抗体在反应管中温育，形成磁性微珠包被抗体-抗原-发光剂标记抗体复合物。
(4)抗原抗体快速检测法：同快速方法(RT)检测抗体，不同之处是用 HIV 抗体包被载体，检测灵敏度同样较差。
2 中和试验
中和试验主要是 p24 抗原检测的补充试验，还可做 HIV-1RNA 的定性或定量检测，以排除筛查试验的假阳性。
(1)酶联免疫吸附实验(ELISA 法)：待检样品先与中和剂(p24 抗原的抗体)共同孵育，如果样品中存在 p24 抗原，中和抗体将与之结合形成复合物，而不能与固相载体上的捕获抗体结合。
(2)酶联荧光分析法(ELFA)：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验(ELISA 法)，中和率 ≥ 60 %，认为样品中的 p24 抗原是真阳性。
(3)电化学发光法 (ECLIA)：原理和检测步骤同上述酶联免疫吸附实验(ELISA 法)，中和率大于 50%，认为样品中的 p24 抗原是真阳性。
HIV 核酸检测
目前国内 HIV 核酸检测试剂主要为 Taqman 实时荧光 PCR 检测试剂，可检测血浆、血清、组织器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于检测 RNA/DNA。全球目前正式用于临床诊断 HIV-1 急性期感染的核酸检测试剂比较少，主要是美国 FDA 批准的 Gen-Probe 公司生产的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性检测试剂和欧盟批准的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性检测试剂。
临床诊断相关的检测策略及结果报告
HIV 检测阳性结果的检测过程一般经历两个阶段，初筛和复检程序。以 HIV 抗体检测为例，具体流程如下：
试剂 1 进行初筛，结果无反应，报告「HIV 抗体阴性」;结果有反应，不能出具阳性报告，必须进入复检试验。对初筛有反应的样品，用原有试剂双份或双孔进行复检试验(或者两种试剂复检)，如均无反应，报告「HIV 抗体阴性」;如均有反应或一个有反应一个无反应，进行补充试验(抗体确证试验和 HIV-1 核酸试验)，报告 HIV 感染待确定。
目前大部分临床实验室为艾滋病初筛实验室，开展常规初筛实验，发现阳性结果初步复检后送省市 CDC 或当地其他确认实验室做确认实验。
目前国内实验室多采用「初筛抗体+WB 法确认」等两步法进行 HIV 检测及确诊，并严格进行人员、仪器、方法学质量控制，建立了遍布全国的临床医疗机构的初筛实验室及省市 CDC 的确认实验室，基本满足了日益增长的艾滋病病人的检测及病情的变化的监测。
艾滋病基本常识
1、艾滋病的由来
艾滋病即获得性免疫缺陷综合症(AcquiredImmunodeficiencySyndrome AIDS)是人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirusHIV)破坏感染者免疫系统,逐渐导致免疫功能衰竭,最终感染者会死于任何一种(即使对正常人来说是微不足道的)感染、恶性肿瘤、神经系统病变;所以,预防、治疗、控制感染是每一个艾滋病感染者都在关心的问题。
2、艾滋病的症状
HIV相关症状:主要表现为持续一个月以上的发热、盗汗、腹泻;体重减轻10%以上。部分病人表现为神经精神症状,如记忆力减退、精神淡漠、性格改变、头痛、癫痫及痴呆等。另外还可出现持续性全身性淋巴结肿大,其特点为除腹股沟以外有两个或两个以上部位的淋巴结肿大;淋巴结直径≥1cm,无压痛,无粘连;持续时间3个月以上。
3、艾滋病的相关机会性感染症状
HIV相关机会性感染及肿瘤的常见症状:发热、盗汗、淋巴结肿大、咳嗽咳痰咯血、呼吸困难、头痛、呕吐、腹痛腹泻、消化道出血、吞咽困难、食欲下降、口腔白斑及溃疡、各种皮疹、视力下降、失明、痴呆、癫痫、肢体瘫痪、消瘦、贫血、二便失禁、尿储留、肠梗阻等。
如何进行自我检测艾滋病
首先要看自己是否有如下高危行为：性生活比较复杂、男同性恋者、吸毒或是与他人混用注射器、曾被感染有艾滋病毒的针头或是血制品感染史、母亲为艾滋病患者等。
如有高危行为者，若是出现以下两种或两种以上情况，要引起高度警觉：近期体重骤降10%以上、慢性腹泻或咳嗽长达一个月以上、持续或间歇发热达一个月以上、全身可触及有淋巴结肿大、反复出现带状疱疹或是慢性播散性单纯疱疹感染、口咽部有念珠菌感染。
抽血进行常规检查，有不同程度的贫血，同时白细胞计数减少提示有病毒感染。尿常规可见尿蛋白。
去医院进行HIV—1抗体的检测，ELISA测定法结果连续两次为阳性者，再行WB法进行确诊。
从血液、单个核细胞及脑脊液中如果能够分离出人免疫缺陷病毒者，可以作为判定感染艾滋病。
得了艾滋病怎么办
如果有不洁的性行为或者有过吸毒行为，那么过了三个月的窗口期，就应该去医院进行艾滋病筛查。如果医院的筛查结果是HIV抗体阳性，那么还需要去疾控中心做最后确诊，如果疾控中心报告结果仍然是阳性，那么就确诊了，您确实感染了HIV病毒。
经过筛查确诊HIV病毒感染者后，最忌讳的就是恐慌和自暴自弃，应该第一时间调整心态，放弃悲观的灰色的心情和想法，积极的接受疾控中心的治疗。当然，目前世界针对艾滋病的治疗除了控制病毒的复制，一般还没有有效杀灭病毒的方法。抗逆转录是对抗艾滋病较为有效的方法。而且，疾控中心是免费发放抗病毒药物的，关键是在发现早起就开始吃药。
科学的用药的同时还要调整心态，如果抑郁，悲观，那么打败你的不是病毒，而是你自己。是你自己低头放弃了希望。调整好心态，平和的面对现实，才能让我们的身体迸发活力，更加积极的对抗病毒的侵蚀。所以一个健康的心态是对抗艾滋病最有效的手段和途径。
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