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链球菌属及其检验
链球菌属(Streptococcus)细菌，呈链状排列的革兰阳性球菌，个别种成双排列。以下是小编整理的链球菌属及其检验，希望对大家有所帮助。
1、分类
链球菌的分类方法尚未统一。常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D …等20个群。同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。对人致病的链球菌菌株，主要是 A群，多数呈现乙型溶血。
2、细菌特性
⑴链球菌
① 形态染色 球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。无芽胞，无鞭毛。多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。革兰染色阳性。
②分离培养 营养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应 触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造 主要有三种：
蛋白质抗原：或称表面抗原。具型特异性有M、T、R、S 4种，位于C抗原外层。与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原：或称C抗原。为群特异性抗原，位于细胞壁。根据C抗原的不同，将链球菌分为20群。对人致病的90%属A群。
核蛋白抗原：或称P抗原。无特异性，为各种链球菌所共有，并与葡萄球菌有交叉。
⑤抵抗力 不强，60℃30min即被杀死。对常用消毒剂敏感。乙型链球菌对青霉素、红霉素、四环素及磺胺类敏感。
⑵ 肺炎链球菌
① 形态染色 革兰阳性球菌，菌体呈矛头状、成双排列，宽端相对，尖端向外，在脓液、痰液及肺组织病变中亦可呈短链状，无鞭毛，无芽胞，在机体内或含血清的培养基中可形成荚膜。
②分离培养 营养要求高，在血平板上形成灰白色、圆形、直径为0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周围有草绿色溶血环。培养时间长时可产生自溶酶。
③生化反应 多数菌株分解菊糖，胆盐溶解试验阳性和optochin敏感试验阳性，籍此可与草绿色链球菌相区别。
④抗原结构
荚膜多糖抗原 可将肺炎链球菌分为85个血清型。肺炎链球菌14型与人类A血型抗原有交叉反应。
多糖抗原 为各型菌株所共有。可被血清中一种C反应蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎症者含量增高，故常以测定CRP作为诊断的依据。
M蛋白：为型特异抗原，与A群链球菌M蛋白类似，但抗原性不同，与毒力无关。
⑤抵抗力 本菌抵抗力弱，对一般消毒剂敏感。有荚膜菌株抗干燥力较强，在干痰中可存活1～2月。对青霉素、红霉素、洁霉素敏感。
⑥ 变异性 有荚膜的肺炎链球菌经人工培养后可发生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R变异，同时随着荚膜的消失，毒力亦随之减弱。将R型菌落的菌株接种动物或在血清肉汤中培养，则又可恢复S型。
3、临床意义
⑴化脓性链球菌
A群链球菌也称化脓性链球菌(pyogenic streptococcus)，致病力强，占人类链球菌感染的90%，能产生多种外毒素和侵袭性酶，如链球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、链激酶、链道酶、透明质酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、脓疱病、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎及变态反应性疾病如急性肾小球肾炎、风湿热等，产毒株还可引起猩红热。链球菌型别多，各型间无交叉免疫，故常反复感染。
⑵乳链球菌
B群链球菌学名无乳链球菌(S.agalactiae)是新生儿败血症和脑膜炎的常见菌，对成人主要引起肾盂肾炎、子宫内膜炎等。
⑶ 肺炎链球菌
肺炎链球菌(S.pneumoniae)，俗称肺炎球菌(pneumococcus)，是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎等。其荚膜在细菌的侵袭力上有重要作用，此外溶血素、神经氨酸酶是主要致病物质。感染后机体可产生牢固的型特异性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。
⑷ 草绿色链球菌
草绿色链球菌亦称甲型溶血性链球菌。是人体口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亚急性细菌性心内膜炎。
4、微生物学检验
⑴标本采集 根据不同疾病采集不同标本。
⑵检验方法
显微镜检查 标本涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初报。
分离培养 血液标本先增菌培养，脓液、咽拭可接种血琼脂平板并涂片染色镜检，初代分离需5%C02，35℃24h观察菌落性状。
⑵肺炎链球菌
①检验程序
②标本采集 根据病变部位采集不同标本。
③检验方法
显微镜检查： 除血液外，痰、脓液等均可直接涂片染色镜检。如发现革兰阳性矛头状双球菌，周围有较宽的透明区，经荚膜染色确认后可初报“找到肺炎链球菌”。
分离培养：血液、脑脊液先增菌，可呈均匀混浊，有绿色荧光。痰液、脓液可直接接种血平板，5%～10%CO2培养后，取可疑菌落进一步作optochin敏感实验、胆盐溶菌试验与菊糖发酵试验，以区别于甲型链球菌。
动物试验：小鼠对肺炎链球菌敏感，12～36h死亡。
荚膜肿胀试验：如遇同型免疫血清，则肺炎链球菌荚膜出现肿胀，为阳性。
④鉴定与鉴别
①Lancefield群特异性抗原鉴定：B群为无乳链球菌，F群为米勒链球菌，A、C、G群抗原不是种特异性抗原，还需根据菌落大小和生化反应进一步鉴定。
②PYR试验：化脓性链球菌为阳性。
③杆菌肽(bacitracin)敏感试验：化脓性链球菌为阳性，有别于其他PYR阳性的β溶血性细菌(猪链球菌、海豚链球菌)和A群小菌落β溶血性链球菌(米勒链球菌)。此法可作为筛选试验。
④VP试验：可鉴别A、C、G群β溶血的大、小两种不同菌落。
⑤CAMP试验：无乳链球菌能产生CAMP因子，它可促进金黄色葡萄球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。试验时先将金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，沿直径划线接种，再沿该线垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔约3～4mm。35℃孵育过夜，两种划线交界处出现箭头状溶血，即为阳性反应。本法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验。
性状
形态与染色
革兰染色阳性，菌体呈球形或卵圆形，直径0.6~1. 0μm，呈链状排列。临床标本及固体培养基中以短链或成对多见，液体培养基中呈长链。无芽胞，无鞭毛，但有菌毛样结构，多数菌株在培养早期可形成荚膜，随着培养时间的延长而消失。衰老、死亡或被吞噬细胞吞噬后革兰染色可呈阴性。
培养特性与生化反应
需氧或兼性厌氧。营养要求较高，在含血液、血清、葡萄糖的培养基中才能生长。最适生长温度为35℃，最适pH为7.4~7.6。在血清肉汤中易成长链，管底呈絮状沉淀。在血琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、凸起、边缘整齐、直径0.5~0. 75 mm的小菌落。不同菌株有不同的溶血现象。
链球菌不产生触酶，可与葡萄球菌相区别。链球菌不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两个特性常被用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
抗原构造
链球菌的抗原构造复杂，主要有3种：
①核蛋白抗原（又称P抗原）：无种特异性，各种链球菌均相同，可与葡萄球菌有交叉反应。
②多糖抗原（又称C抗原）：是细胞壁的多糖成分，有群特异性，是链球菌分群的依据。
③蛋白质抗原（又称表面抗原）：细胞壁外的菌毛样结构含M蛋白，位于C抗原外层，具有型特异性。M蛋白是化脓性链球菌的一种重要毒力因子，具有抗吞噬作用并与致病性有关。
抵抗力
链球菌抵抗力不强，60℃ 30分钟即被杀死，在干燥尘埃中可生存数月，对一般消毒剂敏感。乙型溶血性链球菌对青霉素、红霉素、四环素、杆菌肽及磺胺类药物等敏感。
致病性
A群链球菌
A群链球菌也称为化脓性链球菌，是人类链球菌感染最常见病原菌之一。
1．致病物质A群链球菌有较强的侵袭力，除胞壁成分外，可产生多种外毒素和胞外酶。
(1)M蛋白 是A群链球菌的主要致病因子，含M蛋白链球菌具有抗吞噬和抵抗吞噬细胞内杀菌作用的能力。此外，M蛋白与心肌、肾小球基底膜有共同抗原，能刺激机体产生相应抗体，引起交叉反应，损害人类心血管等组织。在某些条件下，M蛋白与相应抗体形成的免疫复合物可引起急性肾小球肾炎等超敏反应。
(2)链球菌溶血素由乙型溶血性链球菌产生，有两种类型：
①链球菌溶血素O(Streptolysin O，SLO)：是一种含- SH基的蛋白质，对氧敏感，遇氧时- SH被氧化成- ss -基，失去溶血活性，若加入还原剂即可恢复溶血作用。SLO免疫原性强，链球菌感染后2-3周至病愈后数月到一年内，85%~90%的患者血液中可出现抗SLO的抗体，风湿热尤其是活动期患者该抗体显著升高，其效价在1：400以上，可作为链球菌新近感染的重要参考指标。
②链球菌溶血素S( streptolysin S，SLS)：链球菌在血琼脂平板上菌落周围的B溶血环即SLS所致。SLS是小分子糖肽，无免疫原性，对氧不敏感。SLS对白细胞和多种组织细胞有破坏作用。
(3)致热外毒素(pyrogenic exotoxin) 又称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性物质，致热外毒素抗原性强，具有超抗原作用，对兔有致热性和致死性。
(4)侵袭性酶类 A群链球菌可产生多种侵袭性酶，均是扩散因子，主要有三种。
①透明质酸酶(hyaluromidase)：能分解细胞间质的透明质酸，使细菌易在组织中扩散。
②链激酶：( strepto - kinase，SK)：又称链球菌纤维蛋白溶酶，与葡激酶相似，能使血浆中的纤维蛋白酶原转化成纤维蛋白酶，可溶解血块或阻止血浆凝固，有利于细菌在组织中扩散。③链道酶( streptodomase，SD)：又称链球菌DNA酶。主要由A、C、G群链球菌产生。能分解脓液中高度黏稠的DNA，使脓液稀薄，促进细菌扩散。
2．所致疾病链球菌可引起人类多种疾患。A群链球菌引起的疾病约占人类链球菌感染 的90%。感染来源是患者和带菌者。感染方式途径可通过空气飞沫传播，亦可经皮肤伤口感染。
(1)化脓性炎症主要有淋巴管炎、淋巴结炎、蜂窝织炎、痈、脓疱疮等局部皮肤和皮下组织感染，还可引起扁桃体炎、咽炎、咽峡炎、鼻窦炎、产褥感染、中耳炎、乳突炎等及其他系统的感染。
(2)超敏反应性疾病主要有急性肾小球肾炎和风湿热等。
(3)中毒性疾病链球菌毒素休克综合征、猩红热等。
3．免疫性A群链球菌感染后，机体产生多种抗体，同型链球菌可使机体获得特异性免疫力。链球菌型别较多，各型之间无交叉免疫力，所以机体可反复感染。患猩红热后可产生同型的致热外毒素抗体，能建立牢固的同型抗毒素免疫。
肺炎链球菌
肺炎链球菌属链球菌属。广泛分布于自然界，经常寄居于正常人的鼻咽腔中，多数不致病，少数引起大叶性肺炎等疾病。
1．抗原结构与分型
①荚膜多糖抗原：存在于肺炎链球菌荚膜中。根据抗原不同，肺炎链球菌可分为90多个血清型，其中有20多个血清型可引起疾病。
②C多糖抗原：存在于肺炎链球菌细胞壁中，在钙离子存在时，可与血清中一种C反应蛋白(Creartion protein，CRP)结合，故常用肺炎链球菌C多糖来测定C反应蛋白，辅助诊断活动性风湿热及急性炎症性疾病。
2．致病物质本菌的致病物质主要是荚膜荚膜有抗吞噬作用，失去荚膜，细菌就失去致病力。此外，肺炎链球菌溶血素O、脂磷壁酸、神经氨酸酶是肺炎链球菌较重要的致病物质。
3．所致疾病该菌寄生在正常人的口腔及鼻咽腔，一般不致病，当机体免疫力下降时才致病。肺炎链球菌主要引起大叶性肺炎，其次是支气管炎肺炎后可继发脓胸、胸膜炎，也可引起乳突炎、中耳炎、败血症和脑膜炎等。
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