检验技师考点：杂交瘤技术

时间：2024-08-21 10:45:06 蔼媚检验技师/士我要投稿

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检验技师考点：杂交瘤技术

　　杂交瘤技术是指两个或两个以上细胞合并形成一个细胞的现象。他可使两个不同来源的细胞核在同一细胞中表达功能。下面是小编为大家收集的检验技师考点：杂交瘤技术，仅供参考，大家一起来看看吧。

　　检验技师考点：杂交瘤技术

　　杂交瘤技术的基本原理是用分泌抗体但不能长期培养的B细胞与能在体外长期培养并可低温保存的肿瘤细胞进行杂交。筛选得到的杂交瘤细胞应该是既能分泌抗体又有瘤细胞的特性，可长期传代培养，又可在液氮中保存的细胞。把这些细胞单克隆化，用单克隆化的杂交瘤细胞进行单克隆抗体的生产。

　　原理：最常用的单克隆抗体是小鼠的单抗，此外也有大鼠的和人源的单抗。人源单抗制备比较复杂。小鼠单抗的制备通常是使用Balb/c小鼠的B细胞和它的骨髓瘤细胞。大鼠的单抗制备通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤细胞。B细胞是从免疫动物的脾脏中分离出来的。动物免疫方法与抗血清制备相同，只是在制备脾脏前3d必须进行一次静脉加强注射以保证得到的B细胞有旺盛的分泌抗体的活性。骨髓瘤细胞有许多细胞株是经过诱变和筛选得到的缺陷型。筛选的标准是

　　①瘤细胞本身不产生抗体或者产生抗体的某种链，但不能分泌；

　　②是次黄嘌呤鸟嘌呤核苷酸转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型。因为这种缺陷型的瘤细胞正常的核酸合成途径被氨基喋吟(aminopterin)阻断后，由于缺失这些酶，即使补充它的底物次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)，核酸合成的旁路也不能起到救援的作用，结果导致瘤细胞死亡(图7—2)。而杂交瘤细胞因带有B细胞的全套基因，在HAT存在的条件下借助于HGPRT和TK的作用通过替代的核酸合成途径能正常合成DNA和RNA.所以杂交瘤能正常地生长繁殖而被选择出来。未被融合的游离的B细胞只能存活3d而后自行死亡。这就是用HAT培养基进行选择的原理。

　　产生背景

　　科勒和米尔斯廷于1975年发明了淋巴细胞杂交瘤技术，终于使制备纯一抗体的难题获得了解决。杂交瘤技术是由细胞融合技术发展而来。抗体是由免疫的B淋巴细胞分泌的球蛋白，各个淋巴细胞分泌的抗体各不相同。因而，要获得一种纯一的抗体只有从一个B淋巴细胞产生的细胞群制取。然而，B淋巴细胞在体外不能长期存活，分裂2、3次即要死亡，因而无法得到由一个淋巴细胞的后代细胞群(克隆)分泌的大量抗体。骨髓瘤细胞在体外培养条件下具有无限繁衍的特性。免疫B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。这种杂交细胞具有双亲细胞的遗传特性，既能象B淋巴细胞一样分泌抗体，又能象骨髓瘤细胞一样无限增殖，从而成了分泌抗体的“永生细胞”。科勒和米尔斯廷基于这一原理，成功地发明了杂交瘤技术。

　　应用

　　单克隆抗体不仅在生物学和免疫学基础研究中具有重要的价值，而且在实践中的应用范围亦极为广泛。在医学中，单克隆抗体已用于疾病的诊断，其优点是诊断准确，无交叉反应。例如，单克隆抗体诊断乙型肝炎及潜伏的乙型肝炎病毒，则很少发生假阴性的漏诊。单克隆抗体还可作为治疗疾病的药物载体。单克隆抗体对靶组织有专一亲和性，故在体内有特异定位分布的特点。把抗肿瘤药物和抗某种肿瘤的单克隆抗体结合，则可使药物在体内有选择地集中向该肿瘤细胞攻击，只杀灭靶细胞，而不损伤正常组织，大大减轻了抗癌药物的副作用。因此，载药单克隆抗体有“生物导弹”之称。制做的单克隆抗体多为鼠——鼠型，对人来说属异种蛋白质，因此难于用于治疗。为了解决人体对异种单克隆抗体蛋白的排异作用，学者们正努力研制人——人型单克隆抗体，以利于大量应用于治疗疾病。

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