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检验技师考点：多克隆抗体的纯化
多抗的纯化是一件比较简单的事情，因为人工干预比较大，所以对实验者的操作依赖性较强。很多新手觉得这是一件比较复杂困难的工作，但是如果理解了原理，就可以自行改进实验了。多抗纯化方法比较多，过去有用盐析法纯化的，有用辛酸-硫酸铵沉淀的方式纯化的，也有用冷酒精沉淀的方式纯化的，也有后来的离子交换层析和Protein A，G，A/G纯化的，但是在今天，市场上几乎所有的抗体都是通过抗原亲和纯化得到的，与其它方法相比，抗原亲和层析得到的抗体效率高、产量高、产品纯、操作简单。
操作方法：
免疫方法
可以采用以下各种方法之一进行免疫。
(1)淋巴结注射法：①在兔的两后足跖部皮下(或皮内)注射活卡介苗 50mg(每侧约0.30ml) 。7～10 天后，兔跖及腘肌淋巴结肿大;②于肿大的两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml);③必要时，14 天后，重复步骤②一次;④再过 7 天后，于两侧淋巴结内各注射加有完全佐剂的 IgG 乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、链霉素 1 000μg/ml) ;⑤5～7天后，耳静脉采血。测定血清效价。
(2)皮下多点注射法：①家兔两侧掌(跖内各注射含有完全佐剂抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7～10 天后，脊柱两侧多点(颈、胸、腰椎各两点、共 6 点)皮下注射含不完全佐剂5的抗原，每点 0.50ml;③7～10 天后，脊柱两侧重复注射一次;④7～10 天后试血。不合格者重复步骤③。
(3)多途径联合注射法：①两侧掌(跖)内侧皮下注射含完全佐剂抗原 0.50ml(IgG 量为 5mg/ml) ;②14 天后，多点皮下注射含有不完全佐剂抗原;③7 天后，耳静脉注射不含佐剂的抗原 2ml;④测定血清抗体效价，不合格者重复步骤③，并适当递增 IgG 量。
效价测定
采用琼脂扩散法。
⑴ 将血清倍比稀释，加入外周孔。
⑵ 中间孔加动物 Ig。
⑶ 37℃湿盒琼扩 24 小时，观察结果。
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